
細胞處理方法:
產(chǎn)品名稱以下細胞處理方法及細胞說明書僅供參考,具體操作還需要根據(jù)到貨時細胞密度,細胞生長狀態(tài)等具體情況,酌情處理,如需要更詳細技術指導,請及時電話或郵件聯(lián)系。
一.貼壁細胞
客戶接收到細胞,用75%的酒精(建議配制75%酒精的水是過的)培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細胞,當細胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細胞應該在37度培養(yǎng)箱預溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度,培養(yǎng)瓶應預留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
1000rpm,5min離心,重懸細胞。換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
二.懸浮細胞
1. 接收到細胞,用75%的酒精(建議配制75%酒精的水是過的)培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細胞。 換新的細胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基,37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。
產(chǎn)品名稱 |
兔腦血管成纖維細胞 |
規(guī)格 | 詳見說明書 |
貨號 |
FS-016505 |
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為玻璃**,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
pSLAX13 HA His (CT#244)(pSLAX13HAHis) Saos-2 [Saos2]細胞株
Holt與Bitensky改良磷酸鉛法酸磷酸酶顯示試劑盒 pKC30
人白三烯D4(LTD4)ELISA Kit 酪蛋白
SP4 medium 大腸埃希(大腸O157)stx1和stx2基因熒光PCR檢測試劑盒(探針法)
pED-GST-pp-air (pEDGSTppair)(60908-2572) pYIP211(60908-7095)
小鼠蛋白磷酸酶(PP)ELISA Kit MES Buffer,1.0M,pH7.5
Sephadex G50介質(zhì)(見關聯(lián)產(chǎn)品) 人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體(AFA)ELISA Kit
pSB3 AND pSB4(pSB3ANDpSB4) C6細胞株
DIPSO Buffer,0.2M,pH7.4 pGL4.25[luc2CP minP]
猴Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA Kit 豬血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA Kit
Methanogenium olentangyi medium HRP標記的抗His標簽兔多克隆抗體
pCMV flag-c pUC-DIS(pUCDIS)(pUCDISpUCDIS)
人松弛肽/松弛素(RLN)ELISA Kit TBS-Tween-20 (TTBS),20X,pH7.6
小檗紅堿 英文名稱:Berberrubine 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
鴨腳樹葉堿 英文名稱:Picrinine 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
異甜菊 英文名稱:Isosteviol 規(guī)格::HPLC≥98% 10mg/支 保存::-20℃,避光
刺槐素 英文名稱:Acacetin 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
兔腦血管成纖維細胞牡荊素 英文名稱:Vitexin 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
牡荊素鼠李糖苷 英文名稱:Vitexin rhamnoside 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
牡荊素葡萄糖苷 英文名稱:Vitexin glucoside 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
異牡荊素、異牡荊苷 英文名稱:ISO Vitexin, isovitexin 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
龍膽山酮酚 英文名稱:Gentian mountain ketones phenols 規(guī)格::HPLC≥98% 10mg/支 保存::-20℃,避光
木犀草素-5-O-葡萄糖苷 英文名稱:Luteolin -5-O- glucoside 規(guī)格::HPLC≥98% 10mg/支 保存::-20℃,避光
異羥基洋地黃毒苷,地辛 英文名稱:Isopropyl hydroxy digitoxin, digoxin 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光