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產(chǎn)品名稱：小鼠白血病細(xì)胞

產(chǎn)品英文：P388

貨號：BH-X019686

細(xì)胞培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1%P/S

生長狀態(tài)：懸浮生長

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細(xì)胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

主要功能：

（1）血管平滑肌細(xì)胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。

（2）表達(dá)鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應(yīng)。

（3）與血管的進(jìn)展和穩(wěn)定有關(guān)。

 生理變化：

（1）主動脈硬化。

（2）主動脈瘤

（3）主動脈鈣化。

基本特性：

（1）組織來源于正常大鼠大動脈組織。

（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色。

（3）原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。

（4）每凍存管細(xì)胞數(shù)：>5×105 cells/1ml。

（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。

（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

表皮生長因子受體抗體  Anti-EGF-R    0.1ml

表皮生長因子受體-8抗體  Anti-EGFR-ⅤⅢ   0.2ml

早期反應(yīng)基因-1/應(yīng)急反應(yīng)生長基因1抗體  Anti-Egr-1    0.1ml

表皮膜蛋白1抗體  Anti-Emp1    0.2ml

抗內(nèi)膜抗體  anti-EMAb   0.2ml

內(nèi)皮抑素/內(nèi)皮他丁抗體  Anti-Endostatin   0.1ml

上皮粘附分子/表皮粘附分子抗體  Anti-EpCAM   0.2ml

小鼠白血病細(xì)胞激活素A受體Ⅰ(ACVR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforActivinAReceptorTypeI(ACVR1)  規(guī)格：48T/96T  進(jìn)口、國產(chǎn)

球蛋白G2(IgG2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforImmunoglobulinG2(IgG2)  規(guī)格：48T/96T  進(jìn)口、國產(chǎn)

轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforTransformingGrowthFactorBeta1(TGFb1)  規(guī)格：48T/96T  進(jìn)口、國產(chǎn)

前妊蛋白關(guān)聯(lián)內(nèi)膜蛋白(PAEP)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforProgestagenAssociatedEndometrialProtein(PAEP)  規(guī)格：48T/96T  進(jìn)口、國產(chǎn)

膽綠素還原酶A(BLVRA)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforBiliverdinReductaseA(BLVRA)  規(guī)格：48T/96T  進(jìn)口、國產(chǎn)

神經(jīng)連接蛋白1(NLGN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforNeuroligin1(NLGN1)  規(guī)格：48T/96T  進(jìn)口、國產(chǎn)

甘露糖結(jié)合蛋白(MBL)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforMannoseBindingLectin(MBL)  規(guī)格：48T/96T  進(jìn)口、國產(chǎn)

表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白C(SPC)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforSurfactantAssociatedProteinC(SPC)  規(guī)格：48T/96T  進(jìn)口、國產(chǎn)

皮質(zhì)醇結(jié)合球蛋白(CBG)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforCorticosteroidBindingGlobulin(CBG)  規(guī)格：48T/96T  進(jìn)口、國產(chǎn)

腺苷酸激酶7(AK7)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforAdenylateKinase7(AK7)  規(guī)格：48T/96T  進(jìn)口、國產(chǎn)

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過*易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。