操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細胞能盡快通過*易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

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產(chǎn)品名稱：小鼠腎小球系膜細胞

產(chǎn)品英文：SV40-MES-13

貨號：BH-X019696

細胞培養(yǎng)條件：D/F12+10%FBS+1%P/S

生長狀態(tài)：貼壁生長

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

主要功能：

（1）血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。

（2）表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應。

（3）與血管的進展和穩(wěn)定有關。

 生理變化：

（1）主動脈硬化。

（2）主動脈瘤

（3）主動脈鈣化。

基本特性：

（1）組織來源于正常大鼠大動脈組織。

（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色。

（3）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。

（4）每凍存管細胞數(shù)：>5×105 cells/1ml。

（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。

（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

半乳糖凝集素-3抗體  Anti-Galectin-3   0.1ml

神經(jīng)生長相關蛋白-43Anti-GAP-43    0.1ml

3-磷酸甘油醛脫氫酶Anti-GAPDH    0.1ml

G蛋白偶聯(lián)受體-2抗體  Anti-GASR   0.1ml

胃泌素/蛙皮素抗體  Anti-Gastrin   0.1ml

生長終止特異性同源盒基因抗體  Anti-Gax   0.2ml

谷氨酸半胱氨酸γ合成酶抗體  Anti-GCS    0.1ml

小鼠腎小球系膜細胞O-6-甲基鳥嘌呤DNA甲基轉移酶(MGMT)elisa檢測試劑盒英文名稱：MGMT ELISA Kit，英文縮寫：MGMT，產(chǎn)品別名：O-6-甲基鳥嘌呤DNA甲基轉移酶(MGMT)ELISA檢測試劑盒，O-6-甲基鳥嘌呤DNA甲基轉移酶(MGMT)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

Myoferlin蛋白(MYOF)elisa檢測試劑盒英文名稱：MYOF ELISA Kit，英文縮寫：MYOF，產(chǎn)品別名：Myoferlin蛋白(MYOF)ELISA檢測試劑盒，Myoferlin蛋白(MYOF)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

NSFL1輔因子(NSFL1C)elisa檢測試劑盒英文名稱：NSFL1C ELISA Kit，英文縮寫：NSFL1C，產(chǎn)品別名：NSFL1輔因子(NSFL1C)ELISA檢測試劑盒，NSFL1輔因子(NSFL1C)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

Kruppel樣因子5(KLF5)elisa檢測試劑盒英文名稱：KLF5 ELISA Kit，英文縮寫：KLF5，產(chǎn)品別名：Kruppel樣因子5(KLF5)ELISA檢測試劑盒，Kruppel樣因子5(KLF5)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

G抗原7(GAGE7)elisa檢測試劑盒英文名稱：GAGE7 ELISA Kit，英文縮寫：GAGE7，產(chǎn)品別名：G抗原7(GAGE7)ELISA檢測試劑盒，G抗原7(GAGE7)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

Fission1蛋白(FIS1)elisa檢測試劑盒英文名稱：FIS1 ELISA Kit，英文縮寫：FIS1，產(chǎn)品別名：Fission1蛋白(FIS1)ELISA檢測試劑盒，F(xiàn)ission1蛋白(FIS1)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

Derlin2蛋白(DERL2)elisa檢測試劑盒英文名稱：DERL2 ELISA Kit，英文縮寫：DERL2，產(chǎn)品別名：Derlin2蛋白(DERL2)ELISA檢測試劑盒，Derlin2蛋白(DERL2)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

CopineⅡ蛋白(CPNE2)elisa檢測試劑盒英文名稱：CPNE2 ELISA Kit，英文縮寫：CPNE2，產(chǎn)品別名：CopineⅡ蛋白(CPNE2)ELISA檢測試劑盒，CopineⅡ蛋白(CPNE2)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

Calmin蛋白(CLMN)elisa檢測試劑盒英文名稱：CLMN ELISA Kit，英文縮寫：CLMN，產(chǎn)品別名：Calmin蛋白(CLMN)ELISA檢測試劑盒，Calmin蛋白(CLMN)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

ATP結合盒轉運蛋白A1(ABCA1)elisa檢測試劑盒英文名稱：ABCA1 ELISA Kit，英文縮寫：ABCA1，產(chǎn)品別名：ATP結合盒轉運蛋白A1(ABCA1)ELISA檢測試劑盒，ATP結合盒轉運蛋白A1(ABCA1)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

Advillin蛋白(AVIL)elisa檢測試劑盒英文名稱：AVIL ELISA Kit，英文縮寫：AVIL，產(chǎn)品別名：Advillin蛋白(AVIL)ELISA檢測試劑盒，Advillin蛋白(AVIL)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。