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產品名稱：腎小球系膜細胞

產品規(guī)格：5×105

貨號：BH-X019816

產品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供**熒光鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

主要功能：

（1）血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。

（2）表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應。

（3）與血管的進展和穩(wěn)定有關。

 生理變化：

（1）主動脈硬化。

（2）主動脈瘤

（3）主動脈鈣化。

基本特性：

（1）組織來源于正常大鼠大動脈組織。

（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色。

（3）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。

（4）每凍存管細胞數(shù)：>5×105 cells/1ml。

（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。

（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

金黃色葡萄球顯色培養(yǎng)基    500 mL/瓶

Calcium caseinate agar acc.to FRAZIER and RUPP,modified    1.05409.0500MERCK默克

M-ENDO agar LES 膜過濾ENDO瓊脂    1.11277.0505MERCK默克

Malachite-green broth （ｂａｓｅ）孔雀石綠肉湯（基礎）    1.10329.0500MERCK默克

SABOURUD 2％ dextrose agar沙氏 2％右旋糖瓊脂    1.

腎小球系膜細胞神經母瘤抗體(NB-Ab)elisa檢測試劑盒英文名稱：NB-Ab ELISA Kit，英文縮寫：NB-Ab，產品別名：神經母瘤抗體(NB-Ab)ELISA檢測試劑盒，神經母瘤抗體(NB-Ab)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

去乙?；囸I(dGHRL)elisa檢測試劑盒英文名稱：dGHRL ELISA Kit，英文縮寫：dGHRL，產品別名：去乙酰化饑餓(dGHRL)ELISA檢測試劑盒，去乙酰化饑餓(dGHRL)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

肉瘤抗原1(SAGE1)elisa檢測試劑盒英文名稱：SAGE1 ELISA Kit，英文縮寫：SAGE1，產品別名：肉瘤抗原1(SAGE1)ELISA檢測試劑盒，肉瘤抗原1(SAGE1)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

前列腺酸性磷酸酶(PAP)elisa檢測試劑盒英文名稱：PAP ELISA Kit，英文縮寫：PAP，產品別名：前列腺酸性磷酸酶(PAP)ELISA檢測試劑盒，前列腺酸性磷酸酶(PAP)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

皮質醇(Cortisol)elisa檢測試劑盒英文名稱：Cortisol ELISA Kit，英文縮寫：Cortisol，產品別名：皮質醇(Cortisol)ELISA檢測試劑盒，皮質醇(Cortisol)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

尿微量白蛋白(MAU)elisa檢測試劑盒英文名稱：MAU ELISA Kit，英文縮寫：MAU，產品別名：尿微量白蛋白(MAU)ELISA檢測試劑盒，尿微量白蛋白(MAU)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

腦源性神經營養(yǎng)因子(BDNF)elisa檢測試劑盒英文名稱：BDNF ELISA Kit，英文縮寫：BDNF，產品別名：腦源性神經營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA檢測試劑盒，腦源性神經營養(yǎng)因子(BDNF)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

球蛋白G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)elisa檢測試劑盒英文名稱：FcγRⅢ/CD16 ELISA Kit，英文縮寫：FcγRⅢ/CD16，產品別名：球蛋白G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA檢測試劑盒，球蛋白G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

鱗狀癌抗原1(SCCAg1)elisa檢測試劑盒英文名稱：SCCAg1 ELISA Kit，英文縮寫：SCCAg1，產品別名：鱗狀癌抗原1(SCCAg1)ELISA檢測試劑盒，鱗狀癌抗原1(SCCAg1)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

亮氨酸氨基肽酶3(LAP3)elisa檢測試劑盒英文名稱：LAP3 ELISA Kit，英文縮寫：LAP3，產品別名：亮氨酸氨基肽酶3(LAP3)ELISA檢測試劑盒，亮氨酸氨基肽酶3(LAP3)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

可溶性腫瘤壞死因子受體2(sTNF-R2)elisa檢測試劑盒英文名稱：sTNF-R2 ELISA Kit，英文縮寫：sTNF-R2，產品別名：可溶性腫瘤壞死因子受體2(sTNF-R2)ELISA檢測試劑盒，可溶性腫瘤壞死因子受體2(sTNF-R2)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內完全解凍，使細胞能盡快通過*易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。

6）觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。