細胞培養(yǎng)操作：

1) 復蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	AML-12小鼠肝實質(zhì)細胞	英文名稱	AML-12:AML12
產(chǎn)品貨號	A01X1028	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%,
生長特性	貼壁細胞	細胞形態(tài)	上皮細胞樣
產(chǎn)品種屬	小鼠	凍存條件	凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	肝臟	用途	僅供科研研究實驗

商品詳情：

生長特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)方案A（默認）

生長培養(yǎng)基:

DMEM/F12＋10% FBS＋0.5% ITS-G（100×）＋40ng/ml Dexamethasone＋1% P/S

培養(yǎng)條件:

氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃

推薦傳代比例 1:4-1:6

推薦換液頻率 2-3次/周

參考資料(來源文獻)

背景描述 The AML12 (alpha mouse liver 12) cell line was established from hepatocytes from a mouse (CD1 strain, line MT42) transgenic for human TGF alpha.

年齡（性別） 雄性；3月齡

組織來源 肝臟

細胞類型 自發(fā)永生化細胞

生物等級 BSL-1

倍增時間 ~37 hours

致瘤性 NO

基因表達情況 albumin; human transforming growth factor alpha (TGF alpha); mouse TGF alpha.

保藏機構(gòu) ATCC; CRL-2254 BCRC; 60326 BCRJ; 0354

支架蛋白IQGAP2抗體    IQGAP2

自噬相關(guān)蛋白10抗體    Apg10

細胞N-鏈接硫酸酯化糖胺多糖（N-sGAG）含量二甲基亞甲基藍（DMMB）比色法定量檢測試劑盒    小鼠白介素4(IL-4)elisa檢測試劑盒

單胺氧化酶測試盒    CYP1A2蛋白共沉淀分析試劑盒

RAS癌基因家族蛋白RAB40A抗體    RAB40A

表皮生長因子樣蛋白2抗體   CELSR2

葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶抗體  Anti-UGCG/Ceramide glucosyltransferase    泛酸激酶2抗體  Anti-PANK2

Ⅱ型膠原α1 N端前體肽抗體  Anti-procollagen type IIA    精神障礙相關(guān)GAP蛋白抗體  Anti-srGAP3

APC標記的羊抗兔IgG H&L    Goat Anti-Rabbit IgG H&L / APC

鋅指蛋白399抗體    ZDHHC11/ZNF399

牛心肌肌鈣蛋白T(cTn-T)elisa分析檢測試劑盒    cTn-T ELISA kit

小鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)elisa分析檢測試劑盒    HMGB-1ELISAKit

倉鼠白介素3(IL-3)elisa分析檢測試劑盒    IL-3 ELISA Kit

AML-12小鼠肝實質(zhì)細胞人電子轉(zhuǎn)運黃素蛋白-泛醌氧化還原酶/電子轉(zhuǎn)運黃素蛋白脫氫酶(ETFDH)elisa分析檢測試劑盒    HumanETFDHELISAkit

癌/睪丸抗原抗體86抗體    OIP-5/CT86

9號染色體開放閱讀框89抗體    C9orf89

細胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當顯微鏡下細胞形態(tài)和生長密度達到90%時，進行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細胞，吹打細胞使其均勻分散。
（7）吸棄細胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細胞凍存。