細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	DLD-1  人結(jié)腸腺癌細(xì)胞	英文名稱	DLD 1
產(chǎn)品貨號	AXB7204	培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；
生長特性	貼壁生長	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	無血清凍存液，液氮儲存
組織來源	結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞	用途	僅供科研研究實驗

商品詳情：

細(xì)胞別稱；DLD 1; DLD1; CoCL3；人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞

種屬來源；人

年齡性別；成年

組織來源；結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞

生長特性；貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)；上皮細(xì)胞樣

背景簡介；DLD-1細(xì)胞是由D·L·Dexter和其同事于1977-1979年分離的兩株結(jié)直腸腺癌細(xì)胞株中的一株。在ATCC和其它地方進(jìn)行的DNA指紋鑒定和染色體組型分析表明DLD-1細(xì)胞與HCT-15細(xì)胞相似，說明這兩者是來自同一個人的不同克隆。DLD-1細(xì)胞和HCT-15細(xì)胞的遺傳起源可通過DNA指紋鑒定證實，但染色體組型分析顯示它們?nèi)狈θ旧w標(biāo)記一致改變或數(shù)目上一致改變。DLD-1細(xì)胞的CSAp陰性(CSAp-)，p53抗原表達(dá)呈陽性(p53抗原產(chǎn)生了一個C→T點突變導(dǎo)致241位的Ser→Phe)。DLD-1細(xì)胞角蛋白過氧化物酶染色陽性，癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表達(dá)呈陽性，癌基因N-myc的表達(dá)未做檢測。DLD-1細(xì)胞表達(dá)腫瘤特異性核基質(zhì)蛋白CC-2、CC-3、CC-4、CC-5和CC-6。1979年提交到ATCC的DLD-1細(xì)胞代數(shù)不明且污染了支原體，其后經(jīng)過12周多種聯(lián)合培養(yǎng)處理，處理之后每周用Hoechst染色和標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)法檢測。其后連續(xù)11個月不加培養(yǎng)，DLD-1細(xì)胞所有的檢測呈陰性。

STR位點；Amelogenin：X,Y；CSF1PO：11,12；D12S391：19,22；D13S317：8,11；D16S539：12,13；D18S51：11,17；D19S433：14,16；D21S11：29,32.2；D2S1338：17,25；D3S1358：17,17；D5S818：13,13；D6S1043：11,13；D7S820：10,12；D8S1179：15,15；FGA：22,22；Penta E：7,14；TH01：7,9.3；TPOX：8,11；vWA：18,19；

細(xì)胞代數(shù)；10代以內(nèi)

生物等級；1

細(xì)胞規(guī)格；1x106cells/T25或1mL凍存管

支原體檢測；無

保藏機(jī)構(gòu)；ATCC; CCL-221 BCRC; 60132 DSMZ; ACC-278 ECACC; 90102540

培養(yǎng)基；RPMI-1640+10%FBS+1%PS

培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件；無血清凍存液，液氮儲存

人苯丙酸諾龍/苯丙酸去甲睪酮(NP)elisa分析檢測試劑盒       NPELISAKit

細(xì)胞PDGF-B蛋白表達(dá)熒光定量檢測試劑盒       三碘甲狀腺原氨酸(T3)elisa分析檢測試劑盒

羊水通道蛋白5(AQP5)elisa分析檢測試劑盒       AQP5 ELISA kit

軸索過度生長抑制因子B受體抗體       Nogo B receptor

磷酸化白細(xì)胞介素1受體銜接蛋白抗體  Anti-phospho-TIRAP(Tyr86)       磷酸化蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗體  Anti-Phospho-PERK(Thr980)

動物細(xì)胞基因組DNA分離試劑盒       小鼠谷氨酰胺合成酶(GS)elisa檢測試劑盒

通用轉(zhuǎn)錄因子ⅡA亞基1/TFIIA-α抗體      GTF2A1 alpha

穿孔素抗體  Anti-Perforin       細(xì)胞粘附分子伴侶蛋白2抗體  Anti-Sidekick 2FAM83G蛋白抗體       FAM83G

細(xì)胞外基質(zhì)蛋白FRAS1抗體       FRAS1

Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG H&L       Mouse Anti-Guinea Pig IgG H&L / Cy5.5

人C多肽(CP)elisa分析檢測試劑盒       CPELISAKit

小鼠凝血因子Ⅸ(FⅨ)elisa分析檢測試劑盒       FⅨELISAKit

大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)elisa分析檢測試劑盒       BACE1 ELISA Kit

DLD-1  人結(jié)腸腺癌細(xì)胞人黑色素瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)elisa分析檢測試劑盒       MART/Melan-AELISAKit

核受體共激活因子NCOA62抗體       NCOA62

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細(xì)胞凍存。