商品屬性：
產(chǎn)品名稱
英文名稱
DLD-1:DLD1
產(chǎn)品貨號(hào)
A01X703
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%,
生長特性
貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)
上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬
人
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源
結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞
用途
僅供科研研究實(shí)驗(yàn)
商品詳情：
生長特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)方案A（默認(rèn)）
生長培養(yǎng)基:
RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
培養(yǎng)條件:
氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃
推薦傳代比例 1:3-1:4
推薦換液頻率 2-3次/周
參考資料(來源文獻(xiàn))
背景描述 DLD-1細(xì)胞是由D·L·Dexter和其同事于1977-1979年分離的兩株結(jié)直腸腺癌細(xì)胞株中的一株。在ATCC和其它地方進(jìn)行的DNA指紋鑒定和染色體組型分析表明DLD-1細(xì)胞與HCT-15細(xì)胞相似，說明這兩者是來自同一個(gè)人的不同克隆。DLD-1細(xì)胞和HCT-15細(xì)胞的遺傳起源可通過DNA指紋鑒定證實(shí)，但染色體組型分析顯示它們?nèi)狈θ旧w標(biāo)記一致改變或數(shù)目上一致改變。DLD-1細(xì)胞的CSAp陰性(CSAp-)，p53抗原表達(dá)呈陽性(p53抗原產(chǎn)生了一個(gè)C→T點(diǎn)突變導(dǎo)致241位的Ser→Phe)。DLD-1細(xì)胞角蛋白過氧化物酶染色陽性，癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表達(dá)呈陽性，癌基因N-myc的表達(dá)未做檢測。DLD-1細(xì)胞表達(dá)腫瘤特異性核基質(zhì)蛋白CC-2、CC-3、CC-4、CC-5和CC-6。1979年提交到ATCC的DLD-1細(xì)胞代數(shù)不明且污染了支原體，其后經(jīng)過12周多種聯(lián)合培養(yǎng)處理，處理之后每周用Hoechst染色和標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)法檢測。其后連續(xù)11個(gè)月不加培養(yǎng)，DLD-1細(xì)胞所有的檢測呈陰性。
年齡（性別） 男性；
組織來源 結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞
細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類型 腸癌細(xì)胞
生物等級(jí) BSL-1
倍增時(shí)間 ~24-48 hours
致瘤性 Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells).
抗原表達(dá)情況 Blood Type O.The cells are weakly positive for keratins and vimentin.The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.DLD-1 cells are positive for p53 antigen expression (the p53 antigen produced has a C -> T
基因表達(dá)情況 carcinoembryonic antigen (CEA) 0.5 ng/10^6 cells/10 days; colon antigen 3.
保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CCL-221 BCRC; 60132 DSMZ; ACC-278 ECACC; 90102540
細(xì)胞培養(yǎng)操作：
1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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