細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	DU145人前列腺癌細(xì)胞	英文名稱	DU145:DU145
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X706	培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；
生長(zhǎng)特性	貼壁生長(zhǎng)	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
組織來(lái)源	前列腺	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

細(xì)胞別稱：DU 145 ；DU145；DU-145；人前列腺癌細(xì)胞

種屬來(lái)源：人

年齡性別：

組織來(lái)源：前列腺

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

背景簡(jiǎn)介：DU145是從一位有3年細(xì)胞白血病史的前列腺癌患者的腦部轉(zhuǎn)移灶中建立的。該細(xì)胞系未檢測(cè)到敏感性，酸性磷酸酶陽(yáng)性，單個(gè)的細(xì)胞可在軟瓊脂中形成集落。對(duì)此細(xì)胞和原始腫瘤的亞顯微結(jié)構(gòu)分析可見(jiàn)微絨毛、微絲、細(xì)胞橋粒、線粒體、發(fā)達(dá)的高爾基體和異質(zhì)溶酶體。該細(xì)胞不表達(dá)前列腺抗原。

生物等級(jí)：1

細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測(cè)：無(wú)

基因表達(dá)情況：

保藏機(jī)構(gòu)：中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心

培養(yǎng)基：90%MEM+10% FBS+PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

倍增時(shí)間：

STR鑒定位點(diǎn)Amelogenin：X，Y；CSF1PO：10，11；D13S317：12，13，14；D16S539：11，13；D18S51：12；D19S433：13；D21S11：30，33；D2S1338：16；D3S1358：16；D5S818：10，13；D7S820：7，10，11；D8S1179：13，14；FGA：21，22；TH01：7；TPOX：11；vWA：17，18，19；

腺苷酸激酶抗體 ADK       鋅指蛋白155抗體 ZNF155

磷酸化肝細(xì)胞核因子4α抗體 phospho-HNF4 (Ser304)       磷酸化鈉離子/氫離子交換蛋白3抗體 phospho-NHE3 (Ser552)

丙酮酸激酶-M2抗體 PKM2       腸道病毒71型/手足口病病毒3D抗體 EV71 polyprotein 3D

核糖激酶RBKS抗體 RBKS       黑素皮質(zhì)素2受體輔助蛋白2抗體 MRAP2

神經(jīng)特異性蛋白抗體 RTN1       神經(jīng)元特異性蛋白家族成員2抗體 NSG2

CDK5和ABL1酶底物1抗體 CABLES1       DENND5A蛋白抗體 DENND5A

轉(zhuǎn)化相關(guān)基因MED10抗體 MED10      轉(zhuǎn)錄因子源蛋白NKX2.4抗體 Nkx2.4

Naked1蛋白抗體 Naked1       Pacific Blue標(biāo)記人CD16單克隆抗體 human CD16/Pacific Blue牛肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-II(CPT-II)elisa分析檢測(cè)試劑盒       體液過(guò)氧化氫（HYDROGEN PEROXIDE）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒

泛素化組蛋白H2B (Lys120)重組鼠單克隆抗體 Ubiquityl-Histone H2B (Lys120)       肺癌相關(guān)蛋白Y抗體 HOPX/LAGY

大鼠胞漿型磷脂酶A2(cPLA2)elisa檢測(cè)試劑盒       小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β(MIP1β)elisa檢測(cè)試劑盒

土壤多酚氧化酶（PPO）測(cè)試盒       大鼠細(xì)胞核因子κB受體活化因子配基（RANKL）elisa檢測(cè)試劑盒

體外非細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞色素P450亞酶CYP2B2（PROD）活性       小鼠5羥色胺受體2A(5-HTR 2A)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人腸道病毒71型(EV71)抗體(IgM)elisa分析檢測(cè)試劑盒       植物甲羥戊酸激酶（mevalonate kinase）活性比色法

DU145人前列腺癌細(xì)胞小鼠維生素A(VA)elisa檢測(cè)試劑盒       大鼠巨噬細(xì)胞炎癥蛋白1β(MIP-1β/CCL4)elisa檢測(cè)試劑盒

異戊烯基焦磷酸異構(gòu)酶2抗體 IDI2       原癌基因Yes相關(guān)蛋白1抗體 YAP1

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無(wú)超過(guò)80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過(guò)度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。