細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	EA.hy926人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞	英文名稱	EA.hy926:EAhy926
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X707	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%
生長(zhǎng)特性	貼壁細(xì)胞	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	臍靜脈/體細(xì)胞雜交	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)培養(yǎng)基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

背景描述 EA.hy926細(xì)胞是在PEG脅迫下，將原代培養(yǎng)的人臍靜脈細(xì)胞與抗硫niao嘌呤的A549克隆株融合，構(gòu)建的一株人臍靜脈細(xì)胞株。融合子在HAT培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，并以Ⅷ因子相關(guān)抗原篩選，EA.hy926細(xì)胞已經(jīng)過100次以上的群體倍增(PDLs)。電鏡照片顯示，Weibel-Palade小體的細(xì)胞質(zhì)分布以及組織特異性的細(xì)胞器，分化的內(nèi)皮細(xì)胞特性如血管**，體內(nèi)平衡-血栓形成，血壓及炎癥反應(yīng)。

組織來源 臍靜脈/體細(xì)胞雜交

細(xì)胞類型 雜交瘤細(xì)胞

生物等級(jí) 1

倍增時(shí)間 ~12-24 hours

抗原表達(dá)情況 Factor VIII-related antigen; Homo sapiens, expressed

基因表達(dá)情況 Factor VIII-related antigen; Homo sapiens.

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-2922

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白47抗體       CCDC47

大鼠磷酸酶張力蛋白源物(PTEN)elisa檢測(cè)試劑盒       全血線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒

組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶MORF抗體       KAT6B

核糖核酸酶6抗體       Ribonuclease 6

14-3-3τ蛋白抗體  Anti-14-3-3 Tau       原鈣粘附蛋白17抗體  Anti-PCDH17

雌三醇（E3）含量ELISA測(cè)試盒       通用型雞敗血支原體（Mycoplasma；MG）基因檢測(cè)試劑盒

驅(qū)動(dòng)蛋白家族成員15抗體      KIF15

蛋白質(zhì)磷酸酶2調(diào)節(jié)亞基1B抗體  Anti-PPP2R1B       泛素特異性蛋白酶9X抗體  Anti-USP9XGAGE1蛋白抗體       GAGE1

細(xì)胞色素B5結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體       CYB5D1

Cy7標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG H&L       Goat Anti-Guinea Pig IgG H&L / Cy7

綿羊黃體**素(LH)elisa分析檢測(cè)試劑盒       LH ELISA Kit

小鼠端粒酶(TE)elisa分析檢測(cè)試劑盒       TEELISAKit

骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)elisa分析檢測(cè)試劑盒       OT/BGP ELISA Kit

EA.hy926人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞人蛋白激酶C beta II(PKC-bII)elisa分析檢測(cè)試劑盒       PKC-bIIELISAKit

Lon蛋白酶2抗體       LONP2

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。