細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	H1人胚胎干細(xì)胞H1   (WA01)	英文名稱	H1
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X722	培養(yǎng)條件
生長(zhǎng)特性	貼壁生長(zhǎng)	細(xì)胞形態(tài)	球形克隆
產(chǎn)品種屬	人/男性	凍存條件	無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
組織來(lái)源	見(jiàn)說(shuō)明	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

細(xì)胞別稱；H1；人胚胎干細(xì)胞；WA01

種屬來(lái)源；人/男性

組織年齡；內(nèi)細(xì)胞團(tuán)

生長(zhǎng)特性；貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)；球形克隆

背景簡(jiǎn)介；hESC(H1)細(xì)胞株來(lái)源于健康男性內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，貼壁生長(zhǎng)，呈克隆狀，可在hESC/iPSC完全培養(yǎng)基中快速殖，而邊緣分化的細(xì)胞則在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)較慢，從而選擇性擴(kuò)并獲得高純度人多能干細(xì)胞。包裝規(guī)格為1mL凍存管，含量為>1x106個(gè)/mL，且支原體、、酵母和檢測(cè)為陰性。

細(xì)胞代數(shù)；10代以內(nèi)

STR鑒定結(jié)果；Amelogenim：X  Y；D5S818：9，11；D13S317：8,11；D7S820：8，12；D16S539：9，13；vWA：15，17；THO1：9.3，13；TPOX：8，18；CSF1PO：12，13

細(xì)胞規(guī)格；1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測(cè)；無(wú)

培養(yǎng)基；hESC/iPSC細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒（IMC-014）

凍存條件；無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框43抗體       C7ORF43

酪氨酸羥化酶抗體  Anti-Tyrosine Hydroxylase(Neuronal Marker)/Tyk2/TYH       蛋白磷酸酶γ1抗體  Anti-PP1C gamma

DNA結(jié)合蛋白κB抗體       NFRKB

肽CAMP抗體       Cathelicidin

Wnt1信號(hào)通路蛋白3抗體  Anti-WISP3       NK2轉(zhuǎn)錄樣蛋白B抗體  Anti-Nkx2.2/NKX2-2

雞卵白蛋白/卵清蛋白抗體  Anti-OVA/SerpinB8       生長(zhǎng)抑素受體3抗體  Anti-SSTR3

動(dòng)力結(jié)合蛋白DNMBP抗體      DNMBP

維甲酸誘導(dǎo)蛋白1抗體  Anti-RAI1/Retinoid acid induced protein 1       轉(zhuǎn)錄因子TBX6抗體  Anti-TBX6人肌酸激酶工酶BB(CK-BB)elisa分析檢測(cè)試劑盒       CK-BBELISAkit

FLJ45825蛋白抗體       FLJ45825

大鼠白介素27(IL-27)elisa分析檢測(cè)試劑盒       IL-27 ELISA Kit

兔降鈣素基因相關(guān)肽（ CGRP）elisa檢測(cè)試劑盒       茁糖酵解溴百里酚藍(lán)（BTB）瓊脂平板

小鼠組織蛋白酶L(CTSL)elisa檢測(cè)試劑盒       大鼠前動(dòng)力蛋白2(PROK2)elisa檢測(cè)試劑盒

脊柱側(cè)后凸畸形肽酶抗體       KY

H1人胚胎干細(xì)胞H1   (WA01)BCL7B蛋白抗體       BCL7B

NMDA受體調(diào)節(jié)1樣蛋白抗體       NARG1L

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無(wú)超過(guò)80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過(guò)度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。