細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	KU812人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞	英文名稱	KU812:KU812
產(chǎn)品貨號	A01X815	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%
生長特性	懸浮細(xì)胞	細(xì)胞形態(tài)	骨髓母細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	器官：外周血； ：慢性髓性白血??； 細(xì)胞類型：嗜堿性	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

生長特性 懸浮細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 骨髓母細(xì)胞樣

生長培養(yǎng)基 RPMI-1640＋20% FBS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

推薦傳代比例 3×10^5個/mL

推薦換液頻率 2~3次/周

背景描述 KU812細(xì)胞是從一位慢性髓性白血病患者暴發(fā)期的外周血建立的細(xì)胞株，KU812細(xì)胞至少有一個Ph1(費(fèi)城)染色體。KU812細(xì)胞有一些嗜堿性細(xì)胞的標(biāo)記(如Fc受體、堿性顆粒，**組胺)，而標(biāo)記陰性。

年齡（性別） 男；38歲

組織來源 器官：外周血； ：慢性髓性白血??； 細(xì)胞類型：嗜堿性

細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型 白血病細(xì)胞

生物等級 1

倍增時間 ~40-60 hours

抗原表達(dá)情況 CD3; Homo sapiens alanyl (membrane) aminopeptidase (ANPEP, CD13); Homo sapiens

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-2099 BCRC; 60502 BCRJ; 0261 DSMZ; ACC-378 ECACC; 90071807

B細(xì)胞遷移基因4抗體       BTG4

L選擇素抗體  Anti-L-Selectin/CD62L       環(huán)指蛋白133抗體  Anti-RNF133

脂肪分解刺激脂蛋白受體抗體       LSR/Lipolysis Stimulated Lipoprotein Receptor

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白2抗體       SPFH2

溶質(zhì)載體家族蛋白22成員5抗體  Anti-Slc22a5       磷酸化酶β抗體  Anti-PHKB

N-乙酰轉(zhuǎn)移酶8B抗體  Anti-NAT8B       鋅指蛋白340抗體  Anti-ZBTB46/ZNF340/BTBD4

豬瘟病毒抗體      CSFV

血小板源性生長因子受體A抗體(PDGFRα)  Anti-PDGFRA       金屬蛋白酶組織抑制因子-1抗體（N端）  Anti-TIMP-1(NT)鋅指蛋白495C抗體       ZSCAN5C

碳酸酐酶4抗體       CAIV/Carbonic Anhydrase IV

Alexa Fluor 350標(biāo)記羊IgG（型對照)       Goat IgG / AF350

大鼠抗弓形蟲IgM抗體elisa分析檢測試劑盒       Rat anti-toxoplasmosis IgM Antibody ELISA kit

小鼠III型前膠原氨基末端肽(PⅢNP)elisa分析檢測試劑盒       PⅢNPELISAKit

鳥類催乳素(PRL/LTH)elisa分析檢測試劑盒       PRL/LTH ELISA Kit

KU812人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞人白介素2(IL-2)elisa分析檢測試劑盒       HumanIL-2ELISAkit

豬乙腦病毒包膜蛋白抗體       JEV E

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細(xì)胞凍存。