細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	MDA-MB-415人乳腺癌細(xì)胞	英文名稱	MDA-MB-415:MDAMB415
產(chǎn)品貨號	A01X843	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，100%
生長特性	貼壁細(xì)胞	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	未知	用途	僅供科研研究實驗

生長特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

生長培養(yǎng)基 Leibovitz's L-15＋10μg/ml Insulin＋10μg/ml Glutathione＋15% FBS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，100%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:2-1:3

推薦換液頻率 2~3次/周

注意事項 1、該細(xì)胞推薦使用Leibovitz's L-15培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳，會產(chǎn)生細(xì)胞毒性； 2、如您沒有無二氧化碳的培養(yǎng)箱，可使用DMEM替代Leibovitz's L-15，使用DMEM培養(yǎng)基時即可正常通入5%二氧化碳； 3、配套培養(yǎng)基默認(rèn)Leibovitz's L-15配置，如需DMEM配方，請聯(lián)系銷售下單備注更改。

背景描述 MDA-MB-415細(xì)胞源于一名38歲患有乳腺腺癌女性的胸腔積液，MDA-MB-415細(xì)胞表達(dá)WNT7B癌基因。MDA-MB-415細(xì)胞形成平展延伸的上皮細(xì)胞樣，在電鏡下呈現(xiàn)結(jié)節(jié)，伴隨著延伸的微管和微板。MDA-MB-415細(xì)胞不容易用yi酶消化。

年齡（性別） 女性，38歲

組織來源 未知

細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型 乳腺癌細(xì)胞

生物等級 1

致瘤性 No, in immunosuppressed mice.Yes, in semisolid medium.

抗原表達(dá)情況 Blood Type O

基因表達(dá)情況 amelogenin (X chromosome)(AMELEX)

保藏機構(gòu) ATCC; HTB-128

Nonylphenol       9號染色體開放閱讀框153抗體

羊白介素7(IL7)elisa生化檢測試劑盒       IL7 ELISA kit

小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)elisa生化檢測試劑盒       壬基酚抗體

寡核苷酸探針非同位素HRP化學(xué)發(fā)光法DNA南方雜交試劑盒       犬α-1/2干擾素(IFN-α1/2)elisa生化檢測試劑盒

腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子7抗體  Anti-TRAF7       磷酸化血小板源性生長因子受體α/β抗體  Anti-Phospho-PDGFRA(Tyr849)/PDGFRB(Tyr857)

人膀胱癌抗原(UBC)elisa生化檢測試劑盒       UBCELISAKit

大鼠2,3-二磷酸甘油酸(2,3-BPG)elisa檢測試劑盒      C9orf153

磷酸甘油酸脫氫酶抗體  Anti-PHGDH       雙鏈RNA結(jié)合蛋白Staufen2抗體  Anti-STAU2信號傳導(dǎo)T細(xì)胞活化相關(guān)蛋白抗體       SH2D1A

0.5摩爾 EDTA分子生物級溶液       小鼠膽囊收縮素/腸促胰酶肽(CCK)elisa生化檢測試劑盒

PE標(biāo)記的鼠抗人IgG H&L單克隆抗體       Mouse Anti-Human IgG H&L (3D3) mAb / PE

人COP9 結(jié)構(gòu)光形態(tài)發(fā)生同源物亞基2(擬南芥)(COPS2)elisa生化檢測試劑盒       HumanCOPS2ELISAKit

小鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)elisa生化檢測試劑盒       FⅡELISAKit

大鼠β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)elisa生化檢測試劑盒       Aβ1-42 ELISA Kit

MDA-MB-415人乳腺癌細(xì)胞人核心蛋白聚糖(DCN)elisa生化檢測試劑盒       DCNELISAKit

ANDROGEN RECEPTOR 蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒       植物核蛋白提取試劑盒100T

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細(xì)胞凍存。