細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	MDCK狗腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞	英文名稱	MDCK:MDCK
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X1179	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%,
生長(zhǎng)特性	貼壁細(xì)胞	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	狗	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	腎	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)方案A（默認(rèn)）

生長(zhǎng)培養(yǎng)基:

MEM（ATCC改良）＋10% FBS＋1% P/S

培養(yǎng)條件:

氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃

推薦傳代比例 1:2-1:4

推薦換液頻率 2-3次/周

參考資料(來源文獻(xiàn))

背景描述 MDCK(NBL-2)細(xì)胞是由S·H·Madin和N·B·Darby在1958年9月從一只外觀正常的成年雌性英國小獵犬的腎分離得到的；MDCK(NBL-2)細(xì)胞角蛋白過氧化物酶染色呈陽性；MDCK(NBL-2)細(xì)胞被用于研究β-粥樣蛋白前體的處理及其蛋白水解產(chǎn)物。

年齡（性別） 雌性；成年

組織來源 腎

細(xì)胞類型 自發(fā)永生化細(xì)胞

生物等級(jí) BSL-1

基因表達(dá)情況 The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CCL-34 ATCC; CRL-6253ECACC; 84121903 ECACC; 85011435

RNF131       補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白4抗體

鉀離子通道蛋白家族成員4抗體       KCNE4

MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒500T       環(huán)指蛋白131抗體

大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子B(PDGF-B)elisa檢測(cè)試劑盒       載玻片細(xì)胞TNF ALPHA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒

磷酸化神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白SCG10抗體  Anti-phospho-STMN2/SCG10 (Ser50)       血小板白細(xì)胞C激酶底物同源結(jié)構(gòu)域M2抗體  Anti-PLEKHM2/SKIP

真核翻譯起始因子2C4抗體       Argonaute 4

小鼠opiorphin elisa生化檢測(cè)試劑盒      CFHL4

泛酸激酶3抗體  Anti-PANK3       泛素化組蛋白H2AX抗體  Anti-Histone H2A.X (Ubiquityl Lys119)鋅指蛋白ZIC5抗體       ZIC5

貓促甲狀腺素(TSH)elisa生化檢測(cè)試劑盒       石蠟切片皮爾斯（PERLS-DAB）非血紅素鐵（三價(jià)）

膠體金標(biāo)記的兔抗小鼠IgG H&L       Rabbit Anti-Mouse IgG H&L / Gold

綿羊彈性蛋白酶2,中性粒細(xì)胞(ELA2)elisa生化檢測(cè)試劑盒       neutrophil(ELA2)ELISA kit

小鼠的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)elisa生化檢測(cè)試劑盒       Mouserudimentalbovineserumalbumincheck-upELISAKit

甲型流感H5N1(Avian Flu)HA elisa生化檢測(cè)試劑盒       Influenza A H5N1(Avian Flu)HA ELISA Kit

MDCK狗腎轉(zhuǎn)化細(xì)胞人彈性蛋白酶(Elastase)elisa生化檢測(cè)試劑盒       HumanElastaseELISAKit

RNA純化試劑盒 20次       小鼠基質(zhì)γ羧基谷氨酸蛋白(MGP)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。