細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	NCI-H1666人肺支氣管癌細(xì)胞	英文名稱	NCI-H1666
產(chǎn)品貨號	AXB6490	培養(yǎng)條件	RPMI1640 +5% fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2
生長特性	貼壁生長	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	90% FBS + 10% DMSO
組織來源	肺	用途	僅供科研研究實驗

種屬來源；人

組織來源；肺

性別年齡；50歲，白人女性

生長特性；貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)；上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞規(guī)格；1 X 106cells/T25或1 mL凍存管

培養(yǎng)條件；RPMI1640 +5% fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2

凍存條件；90% FBS + 10% DMSO

傳代方法；1:3傳代, 2-3天傳1代

Rabbit Anti-Human IgG H&L / RBITC       磷酸化肝癌缺失基因1抗體

HMX3蛋白抗體       PELP1

絲氨酸蛋白酶抑制劑B12抗體  Anti-SERPINB12       羅丹明標(biāo)記的兔抗人IgG H&L

調(diào)節(jié)染色體組裝激酶1抗體  Anti-TLK1       調(diào)亡誘導(dǎo)因子6相互作用蛋白/多巴胺受體相互作用蛋白4抗體  Anti-PDC6I/Alix

鋅指/環(huán)指蛋白4抗體  Anti-ZNRF4       磷酸化中心粒蛋白Nudel抗體  Anti-phospho-NDEL1(Ser242)

同源盒蛋白B8抗體       HOXB8

蛋白酪氨酸激酶9抗體  Anti-PTK9/TWF1      phospho-DLC1 (Ser567)

磷酸化Rad51抗體  Anti-phospho-RAD51(Tyr315)       維甲酸誘導(dǎo)蛋白6抗體  Anti-STRA6人鈣網(wǎng)蛋白(CRT)elisa生化檢測試劑盒       HumanCRTELISAKit

絲氨酸或半胱氨酸蛋白水解酶抑制蛋白1抗體  Anti-Neuroserpin       蛋白聚糖Versican抗體  Anti-Versican

大鼠Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)elisa生化檢測試劑盒       HPCⅢ ELISA Kit

綿羊Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)elisa檢測試劑盒       石蠟切片組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB直接檢測試劑盒（含HRP一抗）

小鼠催乳素抑制(PIH)elisa生化檢測試劑盒       大鼠II型角蛋白,細(xì)胞骨架71(KRT71)elisa檢測試劑盒

EGF蛋白樣3抗體       MEGF6/EGFL3

NCI-H1666人肺支氣管癌細(xì)胞DMXL2蛋白抗體       DMXL2

睪丸特異激酶2抗體  Anti-TESK2       RAB3-GTP酶激活蛋白催化亞單位1抗體  Anti-RAB3GAP1

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細(xì)胞凍存。