細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	NCI-H522 人非小細(xì)胞肺癌腺癌細(xì)胞	英文名稱	NCI-H522:NCIH522
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X893	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%,
生長(zhǎng)特性	貼壁細(xì)胞	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來(lái)源	肺	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)方案A（默認(rèn)）

生長(zhǎng)培養(yǎng)基:

RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

培養(yǎng)條件:

氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:6

推薦換液頻率 2-3次/周

參考資料(來(lái)源文獻(xiàn))

背景描述 NCI-H522 [H522] is a cell line exhibiting epithelial morphology that were isolated from the lungs of a 58-year-old White male with adenocarcinoma.

年齡（性別） 男性；58歲

組織來(lái)源 肺

細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型 肺癌細(xì)胞

生物等級(jí) BSL-1

倍增時(shí)間 38.2 hours (NCI-DTP=NCI-H522)

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-5810

SGEF       脂質(zhì)磷酸磷酸酶相關(guān)蛋白3抗體

LARP2蛋白抗體       LARP2

鋅指蛋白471抗體  Anti-ZNF471       SGEF蛋白抗體

溴化丙胺太林相關(guān)蛋白2抗體  Anti-STOML2/SLP2       mTOR相關(guān)調(diào)控蛋白抗體  Anti-Raptor

5-羥色胺受體2C抗體  Anti-5HTR2C       腺苷酸硫酸激酶1抗體  Anti-PAPSS1

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基6抗體       COPS6

嗜中性粒細(xì)胞胞漿因子1抗體  Anti-NCF1/p47 phox      LPPR3

多腺苷二磷酸多聚酶4抗體/多聚ADP-核糖聚合酶4  Anti-PARP4       磷酸化轉(zhuǎn)錄因子3抗體  Anti-phospho-TCF3/E47/E2A(Thr355)麥角蛋白抗體       Gliadin

組織三磷酸肌醇（IP3）含量化學(xué)熒光定量檢測(cè)試劑盒       山羊白介素10(IL-10)elisa檢測(cè)試劑盒

羊抗雞IgG H&L抗血清       Goat Anti-Chicken IgG H&L whole serum

雞白介素3(IL-3)elisa生化檢測(cè)試劑盒       IL-3 ELISA Kit

小鼠白蛋白elisa生化檢測(cè)試劑盒       MousealbuminELISAKit

魚雌二醇(E2)elisa生化檢測(cè)試劑盒       E2ELISA kit

NCI-H522 人非小細(xì)胞肺癌腺癌細(xì)胞人丙烯醛(ACR)elisa生化檢測(cè)試劑盒       ACRELISAkit

小鼠新生甲狀腺素(NN-T4)elisa檢測(cè)試劑盒       大鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)elisa檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無(wú)超過(guò)80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過(guò)度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。