培養(yǎng)方法與步驟：
①動物處理：用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡，然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒（浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內，影響培養(yǎng)）后迅速置于的培養(yǎng)皿中，帶入超凈工作臺內進行無菌操作取材。
②取材：將乳鼠俯臥位，用乙醇進行一次背部，再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側的皮膚，剖開腹部，取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中，除去其他連帶組織，用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次，每次1~2 ml，洗去血污，將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離：用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結締組織盡可能去除，然后將肝組織反復剪碎，直至剪成0.5~1 mm3的小塊后，加入PBS 1~2ml，另取1只吸管前端反復吹打清洗組織塊兒3次，棄廢液。
④接種：用吸管加2滴小牛血清，小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液，然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地（組織塊之間相距約0.5 cm左右）排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。
⑤培養(yǎng)：將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉，使瓶底向上，加入1~2 ml培養(yǎng)液，擰緊瓶蓋，做好標記，置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時，待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后，再緩慢翻轉培養(yǎng)瓶（盡量注意不要使組織塊漂浮起來），另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊，將瓶蓋調整在略微松弛狀態(tài)，繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察：細胞接種后一般幾個小時內即可貼壁，并開始生長。如果無污染且細胞生長良好，可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色，此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞，這時可進行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
人腦微血管內皮細胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
組織來源
腦組織
生長特性
貼壁
細胞形態(tài)
內皮細胞樣
分類
人原代細胞
貨號
A01X1504
用途
僅供科研實驗
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 內皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介：
人腦微血管內皮細胞分離自腦組織；腦微血管內皮細胞是血腦屏障的主要組成成分，它是組成腦微血管腔面單層扁平上皮樣細胞，能夠限制可溶性物質和細胞等從血液進入大腦，大腦微血管內皮細胞與外周內皮細胞相比具有一些相同特性。它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質對維持血管張力、調節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用，在腦血管的發(fā)病機制中有重要病理生理學意義。與外周內皮細胞相同，大腦微血管內皮細胞表面表達細胞粘附分子，調控白細胞進入大腦。由于微血管內皮細胞的器官特異性，內皮細胞通常取源于研究的相關組織。其主要特征如下：①腦微血管內皮細胞存在許多細胞間緊密連接，產(chǎn)生很高的跨內皮阻抗，延遲細胞旁的通量；②腦微血管內皮細胞缺乏內皮細胞的窗孔結構，其液相物質胞飲水平較低；③腦微血管內皮細胞具有不對稱定位酶和載體介導轉運系統(tǒng)，從而產(chǎn)生“兩極分化”的表現(xiàn)型。
方法簡介：
公司實驗室分離的人腦微血管內皮細胞采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法結合密度梯度離心法、后通過內皮細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的人腦微血管內皮細胞經(jīng)CD31熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品：
PRL/LTHELISAKit
鴿子白蛋白(Albumin)elisa分析檢測試劑盒
Pigeon Albumin ELISA Kit
人單純皰疹病毒Ⅱ型抗體IgM(HSVⅡ-Ab)elisa分析檢測試劑盒
HSVⅡ-AbELISAKit
豚鼠球蛋白E(IgE)elisa檢測試劑盒
氨肽酶B（aminopeptidase B）
細胞總抗氧化能力（TAC）比色法（DDPH）定量檢測試劑盒
腺苷脫氨酶ADA測試盒 100管/48樣 比色法
鈣激活鉀通道蛋白β4抗體
KCNMB4
細胞粘附分子相關蛋白/癌基因下調蛋白抗體
CDON
牛生長(GH)elisa分析檢測試劑盒
血液過氧化氫（HYDROGEN PEROXIDE）活性熒光定量檢測試劑盒
小鼠巨噬細胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)elisa檢測試劑盒
大鼠膽囊收縮素八肽(CCK-8)elisa檢測試劑盒
環(huán)指蛋白41抗體
RNF41
KLF15蛋白抗體
KLF15
染色體結構維持蛋白6抗體 Anti-SMC6
磷酸化蛋白磷酸酶1C抗體 Anti-phospho-PTPN6(Tyr564)
原鈣粘蛋白γC3抗體 Anti-PCDHGC3/PCDH2
泛素蛋白連接酶E2I抗體 Anti-SUMO-1/UBC9
膠體金標記的兔抗小鼠IgM
人腦微血管內皮細胞Rabbit Anti-Mouse IgM / Gold
甘丙肽受體3抗體
GADL1; GADL1_HUMAN; Glutamate decarboxylase like 1; Glutamate decarboxylase-like protein 1; MGC138191; OTTHUMP00000161199; OTTHUMP00000222306.
人膀胱成纖維細胞
小鼠乳腺成纖維細胞
LS513人結直腸癌細胞
CHO/dhFr-倉鼠卵巢細胞,二氫葉酸還原酶缺陷
原代細胞步驟：
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；
2. 加入2mmol 的 EDTA，搖勻后放置冰上約 30-60min；
3. 離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；
4. 消化期間，置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次，消化時間根據(jù)腫瘤組織來定，約1-2h；
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時，用 40μm 的細胞濾網(wǎng)過濾細胞，收集；
6. 用培養(yǎng)基重懸，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。