
培養(yǎng)方法與步驟:
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺內(nèi)進行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細胞生長良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞,這時可進行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
兔骨細胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
組織來源
骨
生長特性
貼壁
細胞形態(tài)
梭形、多角形
分類
兔原代細胞
貨號
A01X2138
用途
僅供科研實驗
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):梭形、多角形
傳代特性:不增殖;不傳代
消化液:0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔骨細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞簡介:
兔骨細胞分離自骨組織;骨組織的細胞成分包括骨原細胞、成骨細胞、骨細胞和破骨細胞。只有骨細胞存在于骨組織內(nèi),其他三種細胞均位于骨組織的邊緣。骨細胞(Osteocyte)是人體骨骼中主要的細胞成分。在成年人骨骼中,骨細胞占細胞總數(shù)量的90%~95%,大約是成骨細胞數(shù)量的20倍。骨細胞生長在骨骼內(nèi)部的骨基質(zhì)中。骨細胞的細胞體呈梭形或類圓形,位于基質(zhì)構(gòu)成的骨陷窩內(nèi)。與神經(jīng)細胞類似,每個骨細胞具有大量向外延伸的突觸,而這些突觸均位于由骨基質(zhì)構(gòu)成的骨小管結(jié)構(gòu)中。通過這些突觸,骨細胞能夠與骨表面的細胞、周圍其它的骨細胞進行“交流”。普遍認為,骨細胞起源于成骨細胞。在骨形成的終末階段,成骨細胞將可能有3種不同的歸宿:分化成為骨細胞、轉(zhuǎn)移至骨表面成為暫不活動的成骨細胞、進入程序死亡過程(凋亡)。骨細胞為扁橢圓形多突起的細胞,核亦扁圓、染色深。胞質(zhì)弱嗜堿性。電鏡下,胞質(zhì)內(nèi)有少量溶酶體、線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng),高爾基復(fù)合體亦不發(fā)達。骨細胞夾在相鄰兩層骨板間或分散排列于骨板內(nèi)。相鄰骨細胞的突起之間有縫隙連接。在骨基質(zhì)中,骨細胞胞體所占據(jù)的橢圓形小腔,稱為骨陷窩,其突起所在的空間稱骨小管。相鄰的骨陷窩借骨小管彼此通連。骨陷窩和骨小管內(nèi)均含有組織液,骨細胞從中獲得養(yǎng)分。
方法簡介:
實驗室分離的兔骨細胞采用膠原酶消化法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔骨細胞經(jīng)骨鈣素熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
公司正在出售的產(chǎn)品:
Cxcl13/Blc/Scyb13ELISAkit
人類缺陷病毒2型/2型艾滋病病毒gp41+gp160抗體
HIV2 gp120 + gp160
芳香乙酰胺脫乙酰基酶樣蛋白3抗體
AADACL3
小鼠成纖維細胞生長因子8(FGF8)elisa檢測試劑盒
大鼠Coronin-1A(Coro1a/Coro1)elisa檢測試劑盒
F. solani RFLP基因分析試劑盒
人blca-4 elisa分析檢測試劑盒
MAD4蛋白抗體
MAD4
12號染色體開放閱讀框24抗體
C12ORF24
溶質(zhì)載體蛋白家族35成員C2抗體 Anti-SLC35C2
DNA修復(fù)蛋白Rad50抗體 Anti-RAD50
細胞核轉(zhuǎn)錄因子X盒結(jié)合蛋白抗體 Anti-XBP-1
芳基磺基轉(zhuǎn)移酶1抗體
SULT1A1
腫瘤/睪丸抗原3抗體
CT3
絲氨酸蛋白酶抑制劑B11抗體 Anti-SERPINB11
蛋白磷酸酶非受體型4抗體 Anti-PTPN4/MEG1
前列腺干細胞抗原抗體 Anti-PSCA
環(huán)指蛋白92抗體 Anti-TRIM11/RNF92
PE標記馬IgG
兔骨細胞Horse IgG / PE
G蛋白偶聯(lián)受體GPR180蛋白抗體
ST1A1_HUMAN; SULT6B1; Aryl sulfotransferase 1; HAST1/HAST2; Human aryl sulfotransferase mRNA complete cds; P PST 1; P PST; P-PST 1; Phenol sulfating phenol sulfotransferase 1; Phenol sulfotransferase 1; Phenol-sulfating phenol sulfotransferase 1; PST; ST1A1; ST1A3; STP; STP1; Sulfotransferase 1A1; Sulfotransferase family 1A phenol preferring member 1; Sulfotransferase family cytosolic 1A phenol preferring member 1; Sulfotransferase phenol preferring 1; Thermostable phenol sulfotransferase; Ts PST; Ts-PST; TSPST1.
兔冠狀動脈內(nèi)皮細胞
小鼠骨髓單核細胞
QG-56人肺扁平上皮癌細胞
GC-2 SPd(ts)小鼠精母細胞系
原代細胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時間根據(jù)腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細胞濾網(wǎng)過濾細胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。