
培養(yǎng)方法與步驟:
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺內(nèi)進行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細胞生長良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞,這時可進行傳代培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱
大鼠結(jié)膜上皮細胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
組織來源
眼球。
生長特性
貼壁培養(yǎng)
細胞形態(tài)
扁平的橢圓形、梭形或不規(guī)則形
分類
大鼠原代細胞
貨號
A01X1729
用途
僅供科研實驗
細胞特性:
1)組織來源于實驗動物的眼球。
2)細胞鑒定:廣譜角蛋白(PCK)熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式:扁平的橢圓形、梭形或不規(guī)則形,不規(guī)則細胞,貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf原代 上皮 細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
細胞簡介:
結(jié)膜上皮是眼表的重要組成部分,是眼表的保護屏障,在維持淚膜的穩(wěn)定性、潤滑眼表、維持正常視力和眼表上皮損傷修復(fù)中發(fā)揮重要作用。上世紀 90 年代,隨著人們對眼表的深入研究,提出了結(jié)膜上皮干細胞的概念,認為結(jié)膜上皮細胞的自我更新來自結(jié)膜上皮干細胞。
公司正在出售的產(chǎn)品:
直腸腫瘤標記K-ras糞便檢測突變巢式分析試劑盒
黑色素瘤相關(guān)抗原B2抗體
MAGEB2
16號染色體開放閱讀框48抗體
C16orf48
人血小板**素(TPO)elisa檢測試劑盒
蛋類琥珀酸比色法定量檢測試劑盒
Na+K+、Ca2+Mg2+-ATP酶,樣本前處理需高速離心 100管/48樣
大鼠煙堿型乙酰膽堿受體(N-AChR)elisa檢測試劑盒
B細胞白血病前體蛋白轉(zhuǎn)錄因子2抗體
PBX2
腺苷受體蛋白抗體
cAMP-receptor protein
腫瘤壞死因子受體超家族成員14抗體 Anti-TNFRSF14/HVEM
磷酯酶Cγ2抗體 Anti-PLCG 2/PLC gamma 2
蛋白激酶C抗體 Anti-PKC epsilon
跨膜蛋白SEMA4G抗體 Anti-SEMA4G
FITC標記的兔抗人IgG H&L F(ab')2
Rabbit Anti-Human IgG F(ab')? / FITC
ECSIT蛋白抗體
ECSIT
鋅指蛋白211抗體 Anti-ZNF211
鼻咽上皮細胞特異性蛋白1抗體 Anti-NESG1/CCDC19
RAM-11抗體 Anti-Rab27a
軸突導(dǎo)向因子SEMA6D抗體 Anti-SEMA6D
大鼠c-ros致癌基因1,受體激酶(ROS1)elisa分析檢測試劑盒
大鼠結(jié)膜上皮細胞鴨環(huán)磷酸腺苷(cAMP)elisa檢測試劑盒
人蛋白基因產(chǎn)物9.5(PGP 9.5)elisa分析檢測試劑盒
DKFZp781P1017; Lost on transformation 1; Lost on Transformation; LOT-1; LOT1; MGC126275; MGC126276; PLAG like 1; PLAGL1; PLAL1_HUMAN; Pleiomorphic adenoma gene like 1; Pleiomorphic adenoma gene like protein 1; Pleiomorphic adenoma-like protein 1; Tumor supressor ZAC; ZAC; ZAC tumor supressor; ZAC1; Zinc finger protein PLAGL1.
大鼠結(jié)膜上皮細胞
兔腹腔主動脈外膜成纖維細胞
ECV-304人膀胱癌細胞
MA-104恒河猴腎細胞
原代細胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時間根據(jù)腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細胞濾網(wǎng)過濾細胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。