實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡便、快速，但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
細(xì)胞簡介：
單核細(xì)胞是血液中大的血細(xì)胞，是機(jī)體防御系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分。與其他血細(xì)胞比較，單核細(xì)胞內(nèi)含有更多的非特異性脂酶，并且具有更強(qiáng)的吞噬作用。它通過吞噬和產(chǎn)生抗體等方式來抵御和消滅入侵的病原微生物。
單核細(xì)胞能吞噬異物產(chǎn)生抗體，在機(jī)體損傷**、抗御病原的入侵和對的方面起著重要的作用。機(jī)體發(fā)生炎癥或其他都可引起單核細(xì)胞總數(shù)百分比發(fā)生變化，因此檢查單核細(xì)胞計(jì)數(shù)成為輔助診斷的一種重要方法。在機(jī)體的防護(hù)、和創(chuàng)傷愈治過程中起協(xié)同作用。盡管它們是血液中的一類細(xì)胞成分，但它們功能的發(fā)揮，更多地體現(xiàn)在循環(huán)管道外的器官組織中。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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外周血。 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1445 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1）細(xì)胞來源于外周血。
2)細(xì)胞鑒定：MO-1或MO-2熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長方式：半懸浮培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF原代 巨噬 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
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IAH1蛋白抗體
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乳腺癌膜蛋白11/前梯度源蛋白3抗體
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MEIG1蛋白抗體
MEIG1
細(xì)胞周期蛋白3抗體
DNAJA2
結(jié)構(gòu)蛋白家族3抗體 Anti-TCTN3/TECT3
RAS相關(guān)蛋白Rab5B抗體 Anti-Rab5b
神經(jīng)腫瘤Nova1抗原抗體 Anti-Nova1
磷酸化血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體 Anti- phospho-VEGFR2(Tyr951)
TOM1蛋白抗體
TOM1
線粒體核糖體蛋白L38抗體
MRPL38
電壓門控鈉通道5α抗體 Anti-Nav1.5/SCN5A
骨橋蛋白抗體(分泌型磷蛋白1)人 Anti-OPN/BSP
Patched/PTCH抗體 Anti-Patched/PTCH
甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-2抗體 Anti-TTF-2/FOXE1
大鼠IgM（親和純化)
人單核細(xì)胞PKG ELISA Kit
山羊γ干擾素(IFN-γ)elisa分析檢測試劑盒
Complement factor I heavy chain; Factor I heavy chain; AHUS3; C3b INA; C3b inactivator; C3B/C4B inactivator; C3BINA; CFAI_HUMAN; CFI; Complement component I; Complement control protein factor I; Complement factor I; F1; factor I; FactorI; FI; I factor; IF; KAF; Konglutinogen activating factor; Heavy chain of factor I; OTTHUMP00000219728.
人單核細(xì)胞
人蛻膜成纖維細(xì)胞
CNE2(鼻咽癌細(xì)胞)
NCI-H1299人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。