實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
肺癌是上常見的癌癥，僅次于乳腺癌和前列腺癌的第三大常見癌癥，但肺癌是發(fā)病率和死亡率增長快，對人類健康和生命威脅大的惡性腫瘤之一。對肺癌患者患者進行分期很重要，有助于選擇和預后。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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肺癌組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1263 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）細胞來源于人肺癌組織。
2)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
3)細胞生長方式：長梭形，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 delf原代 腫瘤 細胞培養(yǎng)體系 作為該細胞的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
載玻片細胞INSULIN 蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒
魚腎上腺素(EPI)elisa檢測試劑盒
大鼠前列腺素D合成酶(PGDS)elisa檢測試劑盒
血液瓊脂平板
兔膠原吡啶交聯(lián)(PYD)elisa分析檢測試劑盒
T細胞受體α抗體 Anti-TCR alpha
環(huán)指蛋白146抗體 Anti-RNF146
硫酸軟骨素蛋白多糖4/黑色素瘤相關(guān)蛋白抗體 Anti-NG2/CSPG4
等電壓依賴性陰離子通道抗體 Anti-VDAC
線粒體核糖體蛋白S27抗體 MRPS27
小腦肽2抗體 CBLN2
巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白4抗體 BBS4
半胱氨酸蛋白酶8單克隆抗體 Caspase 8
CD2F-10抗體 SLAMF9
CoREST3蛋白抗體 CoREST3
磷酸化3磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體 Phospho-PDPK1 (Tyr373 + Tyr376)
磷酸化Smad2抗體 phospho-Smad2 (Ser465)
周期素依賴性激酶5激活結(jié)合蛋白C53抗體 CDK5RAP3
轉(zhuǎn)錄下調(diào)蛋白1抗體 DR1 protein
骨/軟骨蛋白多糖1抗體 Biglycan
含R3H結(jié)構(gòu)域蛋白R3HDM2抗體 R3HDM2
MOGT1蛋白抗體 MOGT1
NDUFS5蛋白抗體 NDUFS5
溶質(zhì)載體家族25成員48抗體 slc25a48
神經(jīng)生長相關(guān)蛋白SCG10抗體 STMN2
人存活素抗體/生存蛋白(Surv)elisa檢測試劑盒
人肺癌細胞英文名
鋅指蛋白263抗體
multidrug resistance-associated protein2; ABC30; ABCC2; ATP binding cassette sub family C (CFTR/MRP) member 2; ATP binding cassette subfamily C member 2; Canalicular multidrug resistance protein; Canalicular multispecific organic anion transporter 1; CMOAT; CMOAT1; cMRP; DJS; KIAA1010; MRP 2; MRP-2; MRP2; Multidrug resistance associated protein 2; MRP2_HUMAN; ATP-binding cassette sub-family C member 2; Multidrug resistance-associated protein 2.
人肺癌細胞
人輸尿管平滑肌細胞
HRGEC（人腎小球內(nèi)皮細胞）
NCI-H157人非小細胞肺腺癌細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。