
產(chǎn)品名稱
人脊柱炎髖關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
組織來源
關(guān)節(jié)滑膜組織
生長特性
貼壁培養(yǎng)
細(xì)胞形態(tài)
成纖維樣細(xì)胞
分類
人原代細(xì)胞
貨號
A01X1410
用途
僅供科研實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞特性:
1)細(xì)胞來源于手術(shù)取得的脊柱炎患者髖關(guān)節(jié)炎病人的關(guān)節(jié)滑膜組織。
2)細(xì)胞鑒定:纖維連接蛋白(Fibronectin)或波形蛋白(Vimentin)熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長方式:成纖維樣細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
細(xì)胞簡介:
滑膜是關(guān)節(jié)囊的內(nèi)層,淡紅色,平滑閃光,薄而柔潤,由疏松結(jié)締組織組成。關(guān)節(jié)腔內(nèi)的所有結(jié)構(gòu),除關(guān)節(jié)軟骨、半月軟骨板以外 ,即便是通過關(guān)節(jié)腔的肌腱、韌帶等均全部為滑膜所包裹。
滑膜分泌滑液,在關(guān)節(jié)活動中起重要作用。正?;し譃閮蓪?,即薄的細(xì)胞層 (內(nèi)腔層)和血管層(內(nèi)膜下層),是血管豐富的關(guān)節(jié)囊內(nèi)膜,貼附于非關(guān)節(jié)面部分,覆蓋于關(guān)節(jié)囊內(nèi)的骨面上,不在軟骨面上,此部分稱為邊緣區(qū)或裸區(qū)?;こ史奂t色,光滑發(fā)亮、濕而潤滑,有時可見絨毛,內(nèi)含膠原性纖維。
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進(jìn)行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標(biāo)記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細(xì)胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細(xì)胞生長良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補(bǔ)加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細(xì)胞,這時可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
原代細(xì)胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時間根據(jù)腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過濾細(xì)胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

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