實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
結腸在右髂窩內續(xù)于盲腸，在第 3骶椎平面連接直腸。結腸分升結腸、橫結腸、降結腸和乙狀結腸4部，大部分固定于腹后壁，結腸的排列酷似英文字母M，將小腸包圍在內。結腸橫切面由內到外依次為：粘膜（上皮層，固有層，粘膜肌層），粘膜下層，肌層，外膜。
結腸黏膜上皮在環(huán)境或遺傳等多種致癌因素作用下導致結腸癌，是常見的惡性腫瘤之一。因此，體外培養(yǎng)結腸黏膜上皮細胞為研究進一步結腸癌等提供了前提和基礎。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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結腸組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1323 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1） 細胞來源于人正常結腸組織。
2) 細胞鑒定：PCK熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5) 細胞生長方式：多角形，鋪路石樣細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 delf 原代上皮細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
BSPELISAkit
倉鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)elisa分析檢測試劑盒
TNF-α ELISA kit
人對氧磷酶-3(PON3)elisa分析檢測試劑盒
PON3ELISAKit
DHPR受體蛋白表達西方雜交分析試劑盒
雞白血病抑制因子(LIF)elisa分析檢測試劑盒
通用型蛋白電泳考馬斯亮藍染色試劑盒
小鼠干細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)elisa分析檢測試劑盒
磷酸肌醇磷酸酶蛋白INPP5抗體
INPP5F
4號染色體開放閱讀款
C4orf45
細胞GRK4激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
人干擾素誘導T細胞趨化因子(ITAC/CXCL11)elisa檢測試劑盒
大鼠胱天蛋白酶7(CASP7)elisa檢測試劑盒
植物1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RuBisCO)elisa檢測試劑盒免費代測
胞粘蛋白結合調節(jié)蛋白抗體
PSCDBP
A型流感病毒PB1-F2抗體
Influenza A PB1-F2
泛素蛋白連接酶J2抗體 Anti-UBE2J2
轉錄因子Pax6抗體 Anti-PAX6
核糖核酸結合蛋白2抗體 Anti-PTBP2
特異性解旋酶抗體 Anti-SMARCA6/HELLS
PE-CY5標記的驢抗人IgG H&L
人結腸上皮細胞BACE1 ELISA Kit
人黑色素瘤標記物(MART/Melan-A)elisa分析檢測試劑盒
Calcium and DAG-regulated guanine nucleotide exchange factor II; CALDAG-GEFI; CALDAG-GEFII; Guanine nucleotide exchange factor, calcium and DAG regulated, Rap1A; hRasGRP1; Ras activator RasGRP; RAS guanyl nucleotide releasing protein 1; RAS guanyl releasing protein 1 (calcium and DAG-regulated); RAS guanyl releasing protein 1; RASGRP; RASGRP1; GRP1_HUMAN.
人結腸上皮細胞
人臍動脈平滑肌細胞
人甲狀腺癌細胞；K1 (STR)
NCI-H226人間皮瘤細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。