
產(chǎn)品名稱
人內(nèi)皮祖細胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
組織來源
外周血。
生長特性
貼壁培養(yǎng)
細胞形態(tài)
長梭狀
分類
人原代細胞
貨號
A01X1448
用途
僅供科研實驗
細胞特性:
1)細胞來源于人的外周血。
2)細胞鑒定:CD31或CD34熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式:長梭狀,不規(guī)則細胞,貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF原代內(nèi)皮祖細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
細胞簡介:
內(nèi)皮祖細胞是血管內(nèi)皮細胞的前體細胞 ,在生理或病理因素刺激下,可從骨髓動員到外周血參與損傷血管的修復研究顯示,內(nèi)皮祖細胞在心腦血管、外周血管、腫瘤血管形成及創(chuàng)傷等方面均發(fā)揮重要作用,并為缺血性的研究提供了新思路。
內(nèi)皮祖細胞具有游走特性,能進一步增殖分化的幼稚內(nèi)皮細胞,缺乏成熟內(nèi)皮細胞的特征性表型,不能形成管腔樣結構。其功能主要為參與了出生后缺血組織的血管發(fā)生和血管損傷后的修復。
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺內(nèi)進行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結締組織盡可能去除,然后將肝組織反復剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉,使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時,待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細胞接種后一般幾個小時內(nèi)即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細胞生長良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時可補加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細胞,這時可進行傳代培養(yǎng)。
原代細胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時間根據(jù)腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時,用 40μm 的細胞濾網(wǎng)過濾細胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

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