
產(chǎn)品名稱
人臍血DC細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
組織來源
臍血。
生長特性
半懸浮細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)
半懸浮細(xì)胞。
分類
人原代細(xì)胞
貨號
A01X1498
用途
僅供科研實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞特性:
1)細(xì)胞來源于臍血。
2)細(xì)胞鑒定:CD11c熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長方式:半懸浮細(xì)胞。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf原代 樹突狀( DC) 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
細(xì)胞簡介:
樹突狀細(xì)胞( Dendritic cells, DC)是機(jī)體功能強(qiáng)的專職抗原遞呈細(xì)胞,它能高效地?cái)z取、加工處理和遞呈抗原,未成熟DC具有較強(qiáng)的遷移能力,成熟DC能有效激活初始型T細(xì)胞,處于啟動、調(diào)控、并維持應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。
DC的來源有兩條途徑:①髓樣干細(xì)胞在GM-CSF的刺激下分化為DC,稱為髓樣DC,也稱DCl,與單核細(xì)胞和粒細(xì)胞有共同的前體細(xì)胞;包括朗格漢斯細(xì)胞,間皮(或真皮)DCs以及單核細(xì)胞衍生的DCs等,②來源于樣干細(xì)胞,稱為樣DC或漿細(xì)胞樣DC,即DC2,與T細(xì)胞和NK細(xì)胞有共同的前體細(xì)胞。
①動物處理:用頸椎脫白法處死使新生乳鼠斷髓迅速死亡,然后將整個(gè)乳鼠浸入盛有75%酒精的燒杯中2~3秒(浸泡時(shí)間不能過長、以免酒精從口浸入體內(nèi),影響培養(yǎng))后迅速置于的培養(yǎng)皿中,帶入超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行無菌操作取材。
②取材:將乳鼠俯臥位,用乙醇進(jìn)行一次背部,再用的解剖剪剪開背部肋下緣脊柱兩側(cè)的皮膚,剖開腹部,取出肝臟放入另一培養(yǎng)皿中,除去其他連帶組織,用消過毒的吸管小心吸取PBS溶液漂洗肝組織3次,每次1~2 ml,洗去血污,將廢液棄于廢液杯中。
③組織分離:用眼科剪和鑷子將肝門區(qū)所附的血管結(jié)締組織盡可能去除,然后將肝組織反復(fù)剪碎,直至剪成0.5~1 mm3的小塊后,加入PBS 1~2ml,另取1只吸管前端反復(fù)吹打清洗組織塊兒3次,棄廢液。
④接種:用吸管加2滴小牛血清,小心地用彎頭吸管前端將組織塊輕輕吹打均勻制成懸液,然后仍用吸管前端吸取組織懸液、將其均勻地(組織塊之間相距約0.5 cm左右)排種在培養(yǎng)瓶底壁上; 每個(gè)25ml的培養(yǎng)瓶中可接種20塊左右。

⑤培養(yǎng):將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn),使瓶底向上,加入1~2 ml培養(yǎng)液,擰緊瓶蓋,做好標(biāo)記,置 37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)1~2小時(shí),待組織塊略干燥能牢固貼于瓶壁上后,再緩慢翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶(盡量注意不要使組織塊漂浮起來),另加入培養(yǎng)液2 ml左右使其能覆蓋組織塊,將瓶蓋調(diào)整在略微松弛狀態(tài),繼續(xù)置37 ℃恒溫箱靜放培養(yǎng)。
⑥觀察:細(xì)胞接種后一般幾個(gè)小時(shí)內(nèi)即可貼壁,并開始生長。如果無污染且細(xì)胞生長良好,可見培養(yǎng)液顏色由原來的橘紅色變成黃色,此時(shí)可補(bǔ)加或更換培養(yǎng)液。10~15天后可長成致密單層細(xì)胞,這時(shí)可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
原代細(xì)胞步驟:
1. 在無菌條件下的冰上對新鮮離體的腫瘤組織,剔除包膜及壞死組織,無菌PBS清洗3-5次;切成約1mm3組織塊;
2. 加入2mmol 的 EDTA,搖勻后放置冰上約 30-60min;
3. 離心,并加入膠原酶消化(含蛋白酶);
4. 消化期間,置于37°培養(yǎng)箱。每15min搖晃一次,消化時(shí)間根據(jù)腫瘤組織來定,約1-2h;
5. 待大部分組織塊消化成透明狀時(shí),用 40μm 的細(xì)胞濾網(wǎng)過濾細(xì)胞,收集;
6. 用培養(yǎng)基重懸,置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

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