實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
輸卵管位于人體的盆腔內(nèi)，一般的人有兩條，左、右輸卵管各位于一側(cè)。它們由底外側(cè)角部向外，平行伸展，先達(dá)卵巢的端，再沿卵巢系膜緣上行至卵巢的輸卵管端，且呈弓形而覆蓋于卵巢上，然后向下、向內(nèi)行，終止于卵巢的游離緣及其內(nèi)側(cè)面上部。
粘膜層的上皮為單層高柱狀細(xì)胞所構(gòu)成，上皮細(xì)胞可分為 4種不同類(lèi)型：纖毛細(xì)胞、分泌細(xì)胞、楔形細(xì)胞和未分化細(xì)胞。輸卵管是卵子運(yùn)輸、儲(chǔ)存、獲能，以及卵母細(xì)胞采取、運(yùn)送、成熟、受精和早期胚胎發(fā)育的重要場(chǎng)所。輸卵管上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)可以用于飼養(yǎng)層細(xì)胞，與胚胎共培養(yǎng)，克服胚胎的發(fā)育阻滯現(xiàn)象。
因此，
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組織來(lái)源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
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輸卵管組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1364 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1）細(xì)胞來(lái)源于人正常輸卵管組織。
2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞角蛋白-17（CK-17）熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 Delf原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人白三烯C4(LTC4)elisa分析檢測(cè)試劑盒
雞CD4分子(CD4)elisa分析檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞COLLAGEN I蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒
小鼠白三烯D4(LTD4)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠5羥二十碳四烯酸(5-HETE)elisa檢測(cè)試劑盒
CASPASE-4蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒
硫氧還蛋白氧化還原酶（TrxR）測(cè)試盒
線粒體/細(xì)胞核提取試劑盒 50T
小鼠肌鈣蛋白I（cTnI）elisa檢測(cè)試劑盒
組織型纖溶酶原激活蛋白抗體 TPA
1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框131抗體 C1orf131
環(huán)指蛋白107抗體 NIRF
肌醇單磷酸酶1單克隆抗體 IMPA1
PerCP-Cy5.5標(biāo)記人CD10單克隆抗體 human CD10/PerCP-Cy5.5
PE標(biāo)記人TCR γ/δ單克隆抗體 human TCR γ/δ/APC
生長(zhǎng)分化因子8抗體 GDF8
雙鏈RNA腺苷酸脫氨基酶（C端）抗體 ADAR1
FA20A抗體 FA20A
Fascin 2蛋白抗體 Fascin 2
磷酸化纖維束蛋白源物1抗體 phospho-FSCN1 (Ser39)
磷酸化自噬相關(guān)蛋白3抗體 phospho-ATG3 (Tyr18)
大鼠血清型IgA抗體 rat IgA
蛋白賴(lài)氨酸-6-氧化酶單克隆抗體 LOX
鋅指蛋白638抗體 ZNF638
形成素2抗體（成蛋白） FMN2
DNA探針位素（[α32P]dCTP）聚合酶整合標(biāo)記試劑盒
人輸卵管上皮細(xì)胞β-EPR ELISA Kit
人黑色素elisa分析檢測(cè)試劑盒
TASL; TLR adapter interacting with SLC15A4 on the lysosome; Chromosome X open reading frame 21; FLJ11577; Hypothetical protein LOC80231; Uncharacterized protein CXorf21; CX021_HUMAN.
人輸卵管上皮細(xì)胞
人頰黏膜成纖維細(xì)胞
人鼻咽癌細(xì)胞；CNE
OVCAR-8人卵巢癌腺癌細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無(wú)菌操作臺(tái)使用無(wú)菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開(kāi)腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過(guò)的心臟破碎組織塊經(jīng)過(guò)離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過(guò)夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過(guò)夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過(guò)程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來(lái)，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。