細胞簡介：

癌組織由實質(zhì)和間質(zhì)兩部分構(gòu)成，癌細胞構(gòu)成癌實質(zhì)，是癌的主要成分，具有組織來源特異性，癌間質(zhì)一般由結(jié)締組織和血管組成，起支持和營養(yǎng)癌實質(zhì)的作用，不具有特異性。

當實體瘤超過 1-2mm時，需要通過新生的血管和活化的癌相關(guān)成纖維細胞來獲取癌細胞生長和增殖所必須的營養(yǎng)物質(zhì)。其中，癌相關(guān)成纖維細胞可通過分泌多種細胞因子和生長因子來發(fā)揮促進癌血管**的作用。

上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（ EMT）是一種胚胎發(fā)育期的表型轉(zhuǎn)化，在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中也能觀察到相似的EMT過程。而由上皮和間質(zhì)相互作用所形成的腫瘤-宿主界面微環(huán)境的平衡狀態(tài)直

細胞特性：

1）細胞來源于人手術(shù)胰腺癌組織。

2）細胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。

3）經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5）細胞生長方式：長梭形，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基

我們推薦使用 delf 原代成纖維細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實驗具體步驟：

（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，

利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）

鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；

（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；

根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；

實驗方法:

一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。

公司正在出售的產(chǎn)品：