實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
硬腦膜是一厚而堅韌的雙層膜，主要作用是保護大腦。外層是顱骨內面的骨膜，疏松地附于顱蓋。內層較外層堅韌，與硬脊膜在枕骨大孔處續(xù)聯。成纖維細胞屬于由中胚層分化而來的間質細胞。由于這些細胞非常容易培養(yǎng)，它們已經被廣泛用于細胞和分子生物學研究中。
一般而言，成纖維細胞能夠分泌 I型和III型膠原等細胞外基質，并且研究表明不同器官中的成纖維細胞有顯著的不同。傷口修復時，真皮成纖維細胞由可增殖，可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的，可重塑基質的表型，同時，它們會分泌大量的透明質酸來應對修復時的炎癥反應。
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組織來源 |
產品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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腦膜組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1425 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）細胞來源于手術切除的腦膜組織。
2）細胞鑒定：纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。
3）經鑒定細胞純度高于90%。
4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5）細胞生長方式：成纖維樣細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 delf原代 成纖維 細胞培養(yǎng)體系 作為該細胞的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產品：
BrdU標記法組織冰凍切片細胞繁殖熒光顯微鏡檢測試劑盒
小鼠胃泌素抑制肽(GIP)elisa檢測試劑盒
大鼠谷氨酰胺(Gln)elisa分析檢測試劑盒
組織基質金屬（MMP-7）活性比色法定量檢測試劑盒
人輔酶Q10(CoQ10)elisa分析檢測試劑盒
沉默調節(jié)蛋白1抗體 Anti-SIRT1
鳥嘌呤核苷酸交換因子抗體 Anti-RCBTB1/CLLD7
核仁蛋白C23抗體 Anti-Nucleolin/C23
信號通路Wnt5a抗體 Anti-WNT5A
轉錄起始因子RAP30抗體 GTF2F1
自噬相關蛋白8A抗體 APG8A
過氧化物酶體**蛋白5相關蛋白抗體 PEX5L
核受體共激活劑1抗體 NCOA1/KAT13A
ND4L抗體 MTND4L
N-甲基嘌呤DNA糖基化酶 APNG/MPG
乳腺癌易感基因相關蛋白2抗體 PALB2
神經叢蛋白B1抗體 Plexin B1
DEK癌基因結合蛋白 DEK
DNA修復蛋白GIYD2抗體 GIYD2
磷酸化蛋白激酶C theta抗體 phospho-PRKCQ (Thr538)
磷酸化堿性成纖維細胞生長因子受體1/2（CD331/CD332）抗體 Phospho-FGFR1+FGFR2 (Tyr463/Tyr466)
胞外基質蛋白3抗體 Matrilin 3
補體片段C3c抗體 Complement fragment 3c
線粒體釋放因子1樣蛋白抗體 MTRF1
鋅指蛋白139抗體 ZNF139/ZKSCAN1
人N -甲基- D -天冬氨酸抗體IgG(NMDA Antibody IgG)elisa檢測試劑盒
人硬腦膜成纖維細胞Rabbit Anti-Guinea Pig IgM / Cy5
惡性腫瘤丟失蛋白EPLIN抗體
Interleukin 21; Interleukin21; IL 21; IL-21; Za11; Interleukin-21; interleukin-21 isoform; IL21_HUMAN.
人硬腦膜成纖維細胞
人睪丸支持細胞
MDA-MB-436 人乳腺癌細胞
PLC/PRF/5人肝癌細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經過的心臟破碎組織塊經過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據細胞數量種植到對應的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術等。