實驗方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機械分散法的特點是簡便、快速，但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
細胞簡介：
腹腔主動脈是人體的大動脈，直接延續(xù)于發(fā)自左心室的主動脈，胸腔主動脈，沿脊柱左側(cè)下行，主要負責腹腔臟器和腹壁的血液供應(yīng)。主動脈是由內(nèi)膜、中層彈力層和外膜構(gòu)成，三層緊密貼合在一起。其中，外膜是專門的支持組織，外膜成纖維是外膜的主要成分，在血管炎癥反應(yīng)、血管重塑等方面發(fā)揮重要作用。
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組織來源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號 |
用途 |
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主動脈組織 |
5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
A01X2031 |
僅供科研研究實驗 |
細胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常主動脈組織。
2)細胞鑒定：波形蛋白(Vimentin)熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：長梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF 原代 成纖維 細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
細胞絡(luò)磷酸酶（TP）活性熒光定量檢測試劑盒
β-甘露糖苷酶溶酶體樣蛋白抗體
MANBAL
17號染色體開放閱讀框78抗體
C17orf78
冰凍切片組織IP3R受體蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒
犬N端前心鈉肽(NT-ProANP)elisa分析檢測試劑盒
大鼠17-α甲睪酮(17-αMT)elisa檢測試劑盒
小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)elisa檢測試劑盒
原鈣粘附蛋白β14抗體
PCDHB14
凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體
CARD8
TWIST蛋白抗體 Anti-TWIST protein
蛋白酶激活受體-1抗體 Anti-PAR-1/Thrombin receptor
磷酸化蛋白激酶A受體2α亞基抗體 Anti-phospho-PKA R2 (Ser96)
神經(jīng)細胞囊泡循環(huán)蛋白1抗體 Anti-Synaptogyrin 1
FITC標記的兔抗羊IgM
Rabbit Anti-Goat IgM / FITC
EFCAB4A蛋白抗體
EFCAB4A
鋅指蛋白288抗體 Anti-ZNF288/ZBTB20
乳腺癌細胞分化因子P45抗體 Heregulinβ Anti-NRG1/HRG beta 1
RhoA抗體 Anti-RhoA
S100A14/15抗體 Anti-S100A14
大鼠CC趨化因子受體9(CCR9)elisa分析檢測試劑盒
兔腹腔主動脈外膜成纖維細胞活體細胞線粒體內(nèi)膜功能/膜電位紅色熒光（TMRM）測定試劑盒
山羊過氧化氫酶(CAT)elisa分析檢測試劑盒
HePTP; BPTP 4; BPTP4; Dual specificity phosphatase 1; Hematopoietic protein tyrosine phosphatase; LC PTP; LCPTP; LPTP; Protein tyrosine phoshatase non receptor type stress induced; Protein tyrosine phoshatase nonreceptor type stress induced; Protein tyrosine phosphatase LC PTP; Protein tyrosine phosphatase non receptor type 7; PTPN 7; PTPNI; Tyrosine protein phosphatase non receptor type 7; PTN7_HUMAN.
兔腹腔主動脈外膜成纖維細胞
人肺動脈高壓血管內(nèi)皮細胞
Snu-387人肝癌細胞
RPMI8226人多發(fā)性骨髓瘤細胞
實驗具體步驟：
（1）動物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無菌操作臺使用無菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細胞從組織塊中爬出來，同時能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過的心臟破碎組織塊經(jīng)過離心后，可以用細頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個無菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個細胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細胞傳代：當單個細胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進行傳代，此時可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細胞，消化時間根據(jù)正常細胞消化時間即可，當然可以在消化過程中不斷管擦爬出細胞的皺縮情況，一旦達到消化完成（皺縮細胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個細胞時候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來，大概率是不會再貼壁成功啦。根據(jù)細胞數(shù)量種植到對應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細胞在傳代至代、第五代、第十代時候可以將部分細胞進行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細胞術(shù)等。