實(shí)驗(yàn)方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用低速離心。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。其中，機(jī)械分散法的特點(diǎn)是簡(jiǎn)便、快速，但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差，適用于處理纖維成分少的軟組織。消化分離法是指把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
乳腺導(dǎo)管位于胸部的皮下組織中，是的主要構(gòu)成組織之一，也是乳汁的排泄管道。乳腺管的主要功能是乳汁的排泄和儲(chǔ)存每個(gè)乳腺葉都有一個(gè)輸乳管，輸乳管會(huì)在近處形成膨大的輸入管竇，末端變細(xì)并開(kāi)口于。
乳腺被結(jié)締組織分隔為 15-25個(gè) 葉，每個(gè)葉又分為若干小葉，每個(gè)小葉是一個(gè)復(fù)管泡狀腺。腺泡上皮為單層立方或柱狀，導(dǎo)管包括小葉內(nèi)導(dǎo)管、上間導(dǎo)管和總導(dǎo)管。小葉內(nèi)導(dǎo)管多為單層柱狀或立方上皮，小葉間導(dǎo)管為復(fù)層柱狀上皮，總導(dǎo)管又稱輸乳管，開(kāi)口于，管壁為復(fù)層扁平上皮，下表皮相續(xù)。
|
組織來(lái)源 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
貨號(hào) |
用途 |
|
乳腺組織 |
5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
A01X1890 |
僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞特性：
1）細(xì)胞來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常乳腺組織。
2)細(xì)胞鑒定：細(xì)胞角蛋白（PCK）熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用 DELF原代 上皮 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為該細(xì)胞的培養(yǎng)基。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠前列腺素E2（PGE-2）elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠Wolfram綜合征蛋白1(WFS1)elisa檢測(cè)試劑盒
位素RNA北方雜交試劑盒
細(xì)胞P38蛋白表達(dá)熒光定量檢測(cè)試劑盒
谷氨酸脫氫酶GDH測(cè)試盒 50T/48樣 紫外比色法
組織組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶（HAT）總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒
人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體2（TGFβR2）elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠抗IVIgG抗體elisa分析檢測(cè)試劑盒
DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基（無(wú)酚紅）
色氨酸羥化酶抗體 TPH
神經(jīng)肽Y受體5抗體 NPY5R
MOB4A蛋白抗體 MOB4A
NDUFB9蛋白抗體 NDUFB9
周期素依賴性激酶3抗體 CDK3
轉(zhuǎn)錄調(diào)控激活蛋白SNF5抗體 SNF5
谷氧還蛋白/巰基轉(zhuǎn)移酶抗體 Glutaredoxin 1
海藻酸鈉抗體 Sodium alginate
腺嘌呤核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1、2、3、4抗體 ANT1+ANT2+ANT3+ANT4
鋅指蛋白177抗體 ZNF177
白細(xì)胞介素28受體α抗體 IL28 Receptor alpha
苯丙氨酸羥化酶4抗體 PAH
Cervical cancer oncogene 3/宮頸癌原癌基因3抗體 FUNDC2
DHX15蛋白抗體 DHX15
磷酸化p21激活激酶1抗體 phospho-PAK1 (Ser204)
磷酸化磷脂酰肌醇激酶p85β抗體 phospho-PIK3R2 (Tyr467)
大鼠心肌肌鈣蛋白T(cTn-T)elisa檢測(cè)試劑盒
小鼠乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞Mouse Anti-Goat IgG H&L ascites
鋅指蛋白415抗體
Chromosome 18 open reading frame 54; Hypothetical protein LOC162681; LAS2; Lung adenoma susceptibility protein 2; MGC33382; Uncharacterized protein C18orf54; LAS2_HUMAN.
小鼠乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞
大鼠卵巢內(nèi)膜細(xì)胞
Huh7.5人肝癌細(xì)胞
人滑膜肉瘤細(xì)胞； SW 982 (STR)
實(shí)驗(yàn)具體步驟：
（1）動(dòng)物福利：小鼠麻醉犧牲/處死，或者斷頸處死；
（2）小鼠：可以將小鼠腹部使用75%乙醇擦拭3次，或者簡(jiǎn)單粗暴的使用75%乙醇在燒杯中浸泡3min，然后轉(zhuǎn)移至無(wú)菌操作臺(tái)使用無(wú)菌吸水紙/棉花將酒精擦拭干凈；
（3）取出心臟組織：用眼科剪在鑷子的配合下打開(kāi)腹腔，取出心臟組織，置于含有2X雙抗冰冷PBS的培養(yǎng)皿中；
（4）組織：在含有2X雙抗PBS中將心臟一分為二，充分洗滌里邊的血液，/3次，每次5min；
（5）破碎組織：使用眼科鉗或者剪刀，將心臟組織剪碎至1-3 mm3大小組織塊；（備注：如果可以使用0.08% 胰蛋白酶和0.3 mg/ml膠原酶Ⅰ于37℃聯(lián)合消化組織3-5 min，
利于后期細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)，同時(shí)能夠消除部分結(jié)締組織等）
（6）種植組織塊：將上述組織使用2X雙抗冰冷PBS洗滌3次，每次5min，然后使用完全培養(yǎng)基（含有1X雙抗）洗滌一次。經(jīng)過(guò)的心臟破碎組織塊經(jīng)過(guò)離心后，可以用細(xì)頭
鑷子將組織塊種植于培養(yǎng)皿中（備注：破碎組織塊可能還含有液體，可以在一個(gè)無(wú)菌培養(yǎng)皿底沾幾下，把液體）；種植完成后，可以將培養(yǎng)皿正置3-5小時(shí)，然后更換培養(yǎng)皿的
蓋子正置放置過(guò)夜（也可以使用封口膜密閉培養(yǎng)皿在4℃正置過(guò)夜）；
（7）培養(yǎng)基培養(yǎng)：將組織塊中輕柔緩慢的加入完全培養(yǎng)基，然后在恒溫潮濕細(xì)胞培養(yǎng)箱（37℃，5% CO2）培養(yǎng)48h后觀察單個(gè)細(xì)胞從組織塊中爬出情況，一般3-5 day能夠達(dá)到傳代的爬出效率；
（8）貼壁細(xì)胞傳代：當(dāng)單個(gè)細(xì)胞從組織塊爬出面積在組織塊3-5倍，進(jìn)行傳代，此時(shí)可以使用0.25% or 1/3 0.25% 胰蛋白酶消化組織塊爬出的細(xì)胞，消化時(shí)間根據(jù)正常細(xì)胞消化時(shí)間即可，當(dāng)然可以在消化過(guò)程中不斷管擦爬出細(xì)胞的皺縮情況，一旦達(dá)到消化完成（皺縮細(xì)胞≥70%）即可使用完全培養(yǎng)基終止消化。在吹打單個(gè)細(xì)胞時(shí)候，一定要輕柔/緩慢，不能吹打到組織塊，如果組織塊掉下來(lái)，大概率是不會(huì)再貼壁成功啦。根據(jù)細(xì)胞數(shù)量種植到對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)皿/瓶中；
（9）鑒定：細(xì)胞在傳代至代、第五代、第十代時(shí)候可以將部分細(xì)胞進(jìn)行鑒定，鑒定辦法包括：RNA-seq、western blot、qRT-PCR、RT-PCR、IF、流式細(xì)胞術(shù)等。