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PCR試劑盒的特性與注意事項(xiàng)
日期：2025-05-04 12:15
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摘要：
PCR試劑盒帶有Taq DNA Polymerase、PCR buffer、dNTP和上樣緩沖液，自備模板和引物即可進(jìn)行PCR反應(yīng)，適合用于普通的PCR或RT-PCR定性或定量檢測(cè)，也可以用于不太長(zhǎng)的的DNA片段的克隆。
Taq DNA Polymerase是一種來(lái)源于嗜熱菌Thermus aquaticus的高度熱穩(wěn)定的DNA聚合酶，95℃孵育時(shí)的半衰期大于40分鐘。Taq酶的分子量為94kDa。Taq酶可以催化5'至3'方向的依賴(lài)于DNA模板的脫氧核苷酸的聚合。Taq酶沒(méi)有3'至5'的外切酶活性，有非常低的5'至3'外切酶活性。由于Taq酶沒(méi)有3'至5'的外切酶活性，因此在DNA聚合過(guò)程中相當(dāng)于核苷酸轉(zhuǎn)移酶的作用，*終會(huì)導(dǎo)致PCR產(chǎn)物的3'末端會(huì)產(chǎn)生3'-dA overhangs，即產(chǎn)生帶一個(gè)A的3'粘端。本Taq DNA Polymerase為重組酶，通過(guò)大腸桿菌表達(dá)純化獲得，和純化獲得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性質(zhì)相同。
注意事項(xiàng)：
由于PCR反應(yīng)非常靈敏可以擴(kuò)增目的基因序列超過(guò)1000萬(wàn)倍，在使用Taq酶時(shí)請(qǐng)注意避免微量待擴(kuò)增DNA的污染，并盡量考慮設(shè)置不加模板的空白對(duì)照以確認(rèn)是否有待擴(kuò)增DNA的污染。
Taq DNA polymerase在PCR過(guò)程中每循環(huán)的出錯(cuò)幾率約為2.2×10-5，對(duì)于大于1kb的DNA片段的克隆推薦使用出錯(cuò)幾率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA polymerase、BalbTaq DNA polymerase等。對(duì)于普通的PCR或RT-PCR定性檢測(cè)或定量檢測(cè)，Taq DNA polymerase是好的選擇。
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