主營產(chǎn)品：
生化試劑，標準品,對照品，PCR試劑盒，?核酸檢測試劑盒，熒光定量檢測試劑盒，生化試劑盒?，比色法試劑盒，酶活性檢測試劑盒，ELISA試劑盒，酶聯(lián)免yi檢測試劑盒，試劑盒，ELISA試劑盒，抗體，重組蛋白，分光光度法檢測試劑盒，細胞株，原代細胞，細胞培養(yǎng)基，標準溶液產(chǎn)品。代理并銷售進口SIGMA試劑、abcam抗體、R&D抗體、CST抗體、ATCC細胞、BD公司、GE公司、賽默飛世爾公司產(chǎn)品。
新聞詳情
PCR反應引物二聚體控制解析
日期：2025-05-03 23:04
瀏覽次數(shù)：246
摘要：
如果出現(xiàn)了引物二聚體，有許多方法可以減少或消除反應中的引物二聚體。
1、首先是優(yōu)化熱循環(huán)條件，這主要是提高退火溫度。大多數(shù)情況下，兩步循環(huán) (由 95°C 變性步驟直接進入60°C 退火和延伸步驟) 有利于強效擴增，因此引物設計時設定的成功退火溫度為 60°C。
2、可降低引物濃度，甚至采用不同的正向引物和反向引物的比值也有一定的幫助。大多數(shù)情況下，每條引物的理想終濃度為 200 nM，但如有需要...
如果出現(xiàn)了引物二聚體，有許多方法可以減少或消除反應中的引物二聚體。
1、首先是優(yōu)化熱循環(huán)條件，這主要是提高退火溫度。大多數(shù)情況下，兩步循環(huán) (由 95°C 變性步驟直接進入60°C 退火和延伸步驟) 有利于強效擴增，因此引物設計時設定的成功退火溫度為 60°C。
2、可降低引物濃度，甚至采用不同的正向引物和反向引物的比值也有一定的幫助。大多數(shù)情況下，每條引物的理想終濃度為 200 nM，但如有需要，可將濃度降至 60 nM。
3、鎂的佳濃度一般約為 3 mM。高于此濃度易形成引物二聚體。
4、如果未對引物形成二聚體的傾向進行評估，則應補充評估并考慮重新設計 (如有需要)。通常情況下，使用熱啟動 DNA 聚合酶，并在冰上進行反應。
5、在理論上，針對同一靶點應同時檢測多個引物組。這實際上可以節(jié)省大量時間，因為如果這些引物中的一個能立即發(fā)揮作用，則可以減少花費在優(yōu)化過程上的時間。