
細胞培養(yǎng)方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司細胞廣泛用于國內(nèi)院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。
產(chǎn)品名稱 |
兔前脂肪細胞 |
規(guī)格 | 詳見說明書 |
貨號 |
FS-016513 |
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
細胞處理方法:
產(chǎn)品名稱以下細胞處理方法及細胞說明書僅供參考,具體操作還需要根據(jù)到貨時細胞密度,細胞生長狀態(tài)等具體情況,酌情處理,如需要更詳細技術(shù)指導,請及時電話或郵件聯(lián)系。
一.貼壁細胞
客戶接收到細胞,用75%的酒精(建議配制75%酒精的水是過的)培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細胞,當細胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細胞應該在37度培養(yǎng)箱預溫1-2h后再做處理。如未達到細胞傳代密度,培養(yǎng)瓶應預留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
1000rpm,5min離心,重懸細胞。換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
二.懸浮細胞
1. 接收到細胞,用75%的酒精(建議配制75%酒精的水是過的)培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細胞。 換新的細胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基,37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
May-Griinwald-Giemsa 改良法特殊細胞染色試劑盒
大鼠D-酸脫氫酶(D-LDH)ELISA Kit
K7 medium
pCBR-Basic
人抑瘤素M(OSM)ELISA Kit
非凍型組織DNA保存液(100 mL)
pMCSG30 (linearized)
Perdran 染色法網(wǎng)狀纖維染色試劑盒
大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA Kit
Clostridium halophilum medium
pAG425GPD-ccdB-EGFP(pAG425GPDccdBEGFP)
人上皮中粒細胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA Kit
A549細胞株
佛司可林 英文名稱:Forskolin 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
美迪紫檀素 英文名稱:Medicarpin 規(guī)格::HPLC≥98% 5mg/支 保存::-20℃,避光
異澤蘭黃素 英文名稱:Eupatilin 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
傘形花內(nèi)酯、7-羥基豆素 英文名稱:Umbelliferone and 7- hydroxy coumarin 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
兔前脂肪細胞耐斯糖;蔗果四糖 英文名稱:Nice sugar; four sugar cane fruit 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
貝母辛 英文名稱:PEIMISINE 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
西貝母素苷;西貝母苷 英文名稱:Sibelius mother glycoside; imperialine mother glycoside 規(guī)格::HPLC≥98% 10mg/支 保存::-20℃,避光
千層紙素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷 英文名稱:Oroxylin A-7-0- beta -D- glucuronide 規(guī)格::HPLC≥98% 10mg/支 保存::-20℃,避光
鉤藤堿 英文名稱:Rhynchophylline 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
異鉤藤堿 英文名稱:Isorhynchophylline 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光
去氫鉤藤堿;柯諾辛因堿 英文名稱:Corynoxeine; corynoxeine 規(guī)格::HPLC≥98% 20mg/支 保存::-20℃,避光