操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)*易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

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產(chǎn)品名稱(chēng)：小鼠腎小球系膜細(xì)胞

產(chǎn)品英文：SV40-MES-13

貨號(hào)：BH-X019696

細(xì)胞培養(yǎng)條件：D/F12+10%FBS+1%P/S

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁生長(zhǎng)

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細(xì)胞STR鑒定：不提供STR鑒定報(bào)告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運(yùn)輸溫度（℃）：常溫

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

主要功能：

（1）血管平滑肌細(xì)胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。

（2）表達(dá)鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應(yīng)。

（3）與血管的進(jìn)展和穩(wěn)定有關(guān)。

 生理變化：

（1）主動(dòng)脈硬化。

（2）主動(dòng)脈瘤

（3）主動(dòng)脈鈣化。

基本特性：

（1）組織來(lái)源于正常大鼠大動(dòng)脈組織。

（2）鑒定：肌動(dòng)蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色。

（3）原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。

（4）每?jī)龃婀芗?xì)胞數(shù)：>5×105 cells/1ml。

（5）肌動(dòng)蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色驗(yàn)證。

（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。

培養(yǎng)步驟：

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

半乳糖凝集素-3抗體  Anti-Galectin-3   0.1ml

神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43Anti-GAP-43    0.1ml

3-磷酸甘油醛脫氫酶Anti-GAPDH    0.1ml

G蛋白偶聯(lián)受體-2抗體  Anti-GASR   0.1ml

胃泌素/蛙皮素抗體  Anti-Gastrin   0.1ml

生長(zhǎng)終止特異性同源盒基因抗體  Anti-Gax   0.2ml

谷氨酸半胱氨酸γ合成酶抗體  Anti-GCS    0.1ml

小鼠腎小球系膜細(xì)胞O-6-甲基鳥(niǎo)嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MGMT ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：MGMT，產(chǎn)品別名：O-6-甲基鳥(niǎo)嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)ELISA檢測(cè)試劑盒，O-6-甲基鳥(niǎo)嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MGMT)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

Myoferlin蛋白(MYOF)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MYOF ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：MYOF，產(chǎn)品別名：Myoferlin蛋白(MYOF)ELISA檢測(cè)試劑盒，Myoferlin蛋白(MYOF)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

NSFL1輔因子(NSFL1C)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：NSFL1C ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：NSFL1C，產(chǎn)品別名：NSFL1輔因子(NSFL1C)ELISA檢測(cè)試劑盒，NSFL1輔因子(NSFL1C)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

Kruppel樣因子5(KLF5)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：KLF5 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：KLF5，產(chǎn)品別名：Kruppel樣因子5(KLF5)ELISA檢測(cè)試劑盒，Kruppel樣因子5(KLF5)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

G抗原7(GAGE7)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：GAGE7 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：GAGE7，產(chǎn)品別名：G抗原7(GAGE7)ELISA檢測(cè)試劑盒，G抗原7(GAGE7)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

Fission1蛋白(FIS1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：FIS1 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：FIS1，產(chǎn)品別名：Fission1蛋白(FIS1)ELISA檢測(cè)試劑盒，F(xiàn)ission1蛋白(FIS1)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

Derlin2蛋白(DERL2)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：DERL2 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：DERL2，產(chǎn)品別名：Derlin2蛋白(DERL2)ELISA檢測(cè)試劑盒，Derlin2蛋白(DERL2)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

CopineⅡ蛋白(CPNE2)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CPNE2 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：CPNE2，產(chǎn)品別名：CopineⅡ蛋白(CPNE2)ELISA檢測(cè)試劑盒，CopineⅡ蛋白(CPNE2)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

Calmin蛋白(CLMN)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CLMN ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：CLMN，產(chǎn)品別名：Calmin蛋白(CLMN)ELISA檢測(cè)試劑盒，Calmin蛋白(CLMN)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1(ABCA1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：ABCA1 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：ABCA1，產(chǎn)品別名：ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1(ABCA1)ELISA檢測(cè)試劑盒，ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A1(ABCA1)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

Advillin蛋白(AVIL)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：AVIL ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：AVIL，產(chǎn)品別名：Advillin蛋白(AVIL)ELISA檢測(cè)試劑盒，Advillin蛋白(AVIL)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。