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產(chǎn)品名稱：豬鼻甲黏膜成纖維細胞

產(chǎn)品英文：PT-K75

貨號：BH-X019744

細胞培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS+1%P/S

生長狀態(tài)：貼壁生長

產(chǎn)品規(guī)格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

主要功能：

（1）血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。

（2）表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應。

（3）與血管的進展和穩(wěn)定有關。

 生理變化：

（1）主動脈硬化。

（2）主動脈瘤

（3）主動脈鈣化。

基本特性：

（1）組織來源于正常大鼠大動脈組織。

（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色。

（3）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。

（4）每凍存管細胞數(shù)：>5×105 cells/1ml。

（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。

（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。

培養(yǎng)步驟：

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

關節(jié)炎相關基因抗體  Anti-PADI4/PAD4  0.1ml

血小板活化因子抗體  Anti-PAF    0.1ml

乳癌易感基因相關蛋白2anti-PALB2   0.2ml

磷脂酸磷酸酶2C抗體  Anti-PAP2c    0.1ml

蛋白酶激活受體-1抗體  Anti-PAR-1    0.2ml

蛋白酶激活受體-2抗體  Anti-PAR-2    0.2ml

蛋白酶活化受體4/前列腺凋亡反應蛋白4抗體  Anti-PAR4    0.1ml

豬鼻甲黏膜成纖維細胞小扁豆素結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體2(AFP-L2)elisa檢測試劑盒英文名稱：AFP-L2 ELISA Kit，英文縮寫：AFP-L2，產(chǎn)品別名：小扁豆素結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體2(AFP-L2)ELISA檢測試劑盒，小扁豆素結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體2(AFP-L2)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

胃抑素(GIP)elisa檢測試劑盒英文名稱：GIP ELISA Kit，英文縮寫：GIP，產(chǎn)品別名：胃抑素(GIP)ELISA檢測試劑盒，胃抑素(GIP)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

色素P450c21B/21-羥化酶(CYP21B)elisa檢測試劑盒英文名稱：CYP21B ELISA Kit，英文縮寫：CYP21B，產(chǎn)品別名：色素P450c21B/21-羥化酶(CYP21B)ELISA檢測試劑盒，色素P450c21B/21-羥化酶(CYP21B)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

蛙皮素(BBS)elisa檢測試劑盒英文名稱：BBS ELISA Kit，英文縮寫：BBS，產(chǎn)品別名：蛙皮素(BBS)ELISA檢測試劑盒，蛙皮素(BBS)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

糖原磷酸化酶(GP)elisa檢測試劑盒英文名稱：GP ELISA Kit，英文縮寫：GP，產(chǎn)品別名：糖原磷酸化酶(GP)ELISA檢測試劑盒，糖原磷酸化酶(GP)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

胎盤催乳素(HPL)elisa檢測試劑盒英文名稱：HPL ELISA Kit，英文縮寫：HPL，產(chǎn)品別名：胎盤催乳素(HPL)ELISA檢測試劑盒，胎盤催乳素(HPL)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶B-raf(BRAF)elisa檢測試劑盒英文名稱：BRAF ELISA Kit，英文縮寫：BRAF，產(chǎn)品別名：絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶B-raf(BRAF)ELISA檢測試劑盒，絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶B-raf(BRAF)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

生長調節(jié)致癌基因β/黑素瘤生激因子(GROβ/CXCL2/MGSA)elisa檢測試劑盒英文名稱：GROβ/CXCL2/MGSA ELISA Kit，英文縮寫：GROβ/CXCL2/MGSA，產(chǎn)品別名：生長調節(jié)致癌基因β/黑素瘤生激因子(GROβ/CXCL2/MGSA)ELISA檢測試劑盒，生長調節(jié)致癌基因β/黑素瘤生激因子(GROβ/CXCL2/MGSA)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

神經(jīng)生長因子受體(NGFR)elisa檢測試劑盒英文名稱：NGFR ELISA Kit，英文縮寫：NGFR，產(chǎn)品別名：神經(jīng)生長因子受體(NGFR)ELISA檢測試劑盒，神經(jīng)生長因子受體(NGFR)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

乳酸脫氫酶(LDH)elisa檢測試劑盒英文名稱：LDH ELISA Kit，英文縮寫：LDH，產(chǎn)品別名：乳酸脫氫酶(LDH)ELISA檢測試劑盒，乳酸脫氫酶(LDH)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

去乙?；窼irtuin-4(SIRT4/SIR2L4)elisa檢測試劑盒英文名稱：SIRT4/SIR2L4 ELISA Kit，英文縮寫：SIRT4/SIR2L4，產(chǎn)品別名：去乙?；窼irtuin-4(SIRT4/SIR2L4)ELISA檢測試劑盒，去乙酰化酶Sirtuin-4(SIRT4/SIR2L4)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內完全解凍，使細胞能盡快通過*易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。

6）觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。