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產品名稱：B27無血清添加劑

英文名稱：B27

貨號：BH-X020062

規(guī)格：10ml

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

主要功能：

（1）血管平滑肌細胞的再生能力是原發(fā)血管病變的重要因素。

（2）表達鈣通道及ICAM-1和VCAM-1，參與血管壁的炎癥反應。

（3）與血管的進展和穩(wěn)定有關。

 生理變化：

（1）主動脈硬化。

（2）主動脈瘤

（3）主動脈鈣化。

基本特性：

（1）組織來源于正常大鼠大動脈組織。

（2）鑒定：肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色。

（3）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。

（4）每凍存管細胞數(shù)：>5×105 cells/1ml。

（5）肌動蛋白，alpha-SMA和Desmin熒光染色驗證。

（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、酵母。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

RPMI 1640，（1X），液體 （ IVD）    不含L-谷氨酰胺21870-076

Casein Hydrolysate（Acid）/酪蛋白水解物（酸解) 現(xiàn)貨    Oxoid500g

改良Czapek Dox 瓊脂 (CM0097)    Oxoid

腦心浸出液瓊脂 (CM0375)    Oxoid

橙血清瓊脂 (CM0657)    Oxoid

炭疽桿沉淀血清    1ml炭疽桿檢測用配套試劑

植物（大豆）蛋白胨       200培養(yǎng)基原材料，含碳水化合物，提供細生長氮源

B27無血清添加劑Rho蛋白1(RHPN1)elisa檢測試劑盒英文名稱：RHPN1 ELISA Kit，英文縮寫：RHPN1，產品別名：Rho蛋白1(RHPN1)ELISA檢測試劑盒，Rho蛋白1(RHPN1)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

N-去乙?；?磺基轉移酶3(NDST3)elisa檢測試劑盒英文名稱：NDST3 ELISA Kit，英文縮寫：NDST3，產品別名：N-去乙?；?磺基轉移酶3(NDST3)ELISA檢測試劑盒，N-去乙?；?磺基轉移酶3(NDST3)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

Persephin蛋白(PSPN)elisa檢測試劑盒英文名稱：PSPN ELISA Kit，英文縮寫：PSPN，產品別名：Persephin蛋白(PSPN)ELISA檢測試劑盒，Persephin蛋白(PSPN)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

Nesprin3蛋白(Nesp3)elisa檢測試劑盒英文名稱：Nesp3 ELISA Kit，英文縮寫：Nesp3，產品別名：Nesprin3蛋白(Nesp3)ELISA檢測試劑盒，Nesprin3蛋白(Nesp3)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

Maestro蛋白(MRO)elisa檢測試劑盒英文名稱：MRO ELISA Kit，英文縮寫：MRO，產品別名：Maestro蛋白(MRO)ELISA檢測試劑盒，Maestro蛋白(MRO)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

Intersectin2蛋白(ITSN2)elisa檢測試劑盒英文名稱：ITSN2 ELISA Kit，英文縮寫：ITSN2，產品別名：Intersectin2蛋白(ITSN2)ELISA檢測試劑盒，Intersectin2蛋白(ITSN2)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

Girdin蛋白(GRDN)elisa檢測試劑盒英文名稱：GRDN ELISA Kit，英文縮寫：GRDN，產品別名：Girdin蛋白(GRDN)ELISA檢測試劑盒，Girdin蛋白(GRDN)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

D-二聚體(D2D)elisa檢測試劑盒英文名稱：D2D ELISA Kit，英文縮寫：D2D，產品別名：D-二聚體(D2D)ELISA檢測試劑盒，D-二聚體(D2D)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

Cullin7蛋白(CUL7)elisa檢測試劑盒英文名稱：CUL7 ELISA Kit，英文縮寫：CUL7，產品別名：Cullin7蛋白(CUL7)ELISA檢測試劑盒，Cullin7蛋白(CUL7)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

CD3d分子(CD3d)elisa檢測試劑盒英文名稱：CD3d ELISA Kit，英文縮寫：CD3d，產品別名：CD3d分子(CD3d)ELISA檢測試劑盒，CD3d分子(CD3d)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

BTG3關聯(lián)核蛋白(BANP)elisa檢測試劑盒英文名稱：BANP ELISA Kit，英文縮寫：BANP，產品別名：BTG3關聯(lián)核蛋白(BANP)ELISA檢測試劑盒，BTG3關聯(lián)核蛋白(BANP)檢測試劑盒產品保存：2~8℃、有效期6個月。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內完全解凍，使細胞能盡快通過*易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。

6）觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。