
抗體修復(fù)方法:
方法1:沸水浴修復(fù),將盛有修復(fù)液和玻片的燒杯置于沸水浴環(huán)境,保持外部沸騰狀態(tài)15min,自然冷卻至室溫;
方法2:微波修復(fù),將盛有修復(fù)液和玻片的燒杯置于微波爐中,高火5min,?;?min,中火5min,自然冷卻至室溫。
類標(biāo)記抗體相關(guān)驗(yàn)室指導(dǎo):脫片的原因可能有以下幾點(diǎn):
(1)切片在脫蠟之前沒有進(jìn)行烤片,一般片子在做之前需烤片。 烤片的目的是將帶有蠟的組織切片牢固地黏在載玻片上,以免染色過程中切片脫落。切片在56—60℃的恒溫箱中至少放置1小時(shí)才能達(dá)到此目的,但是,通常的烤片溫度為;8~60℃,時(shí)間為2—6小時(shí)。由于高溫干燥可加速組織中抗原的氧化,因此高溫烤片對(duì)抗原有破壞作用;
(2)在貼片前,載玻片處理的不夠干凈。處理載玻片的步驟:洗滌劑洗-水洗-過酸-水洗-酒精浸泡-晾干-多聚賴氨酸掛片-晾干備用;
(3)粘片劑涂的太少或是粘片劑配得濃度不夠。一般用0.1 mg/ml的多聚賴氨酸進(jìn)行包被。多聚賴氨酸在水溶液中易分解,所以一次不要配太多工作液。配制多聚賴氨酸溶液使用超純水(每100mL已稀釋的多聚賴氨酸溶液要包被的玻片40-90張, 超過90張片子將影響其黏合力),釋過的多聚賴氨酸溶液要放在2-8℃,至少在3個(gè)月內(nèi)是穩(wěn)定的;
(4)展片:一定要展開,盡量等標(biāo)本完全展平在往載玻片上貼!而且貼的時(shí)候不要有氣泡,如果展片不好的話,可以多烤一會(huì)。掉片也會(huì)有是這個(gè)原因,特別是標(biāo)本面積很小的;
(5)切片時(shí)盡量要?。?-5微米),平展不要有皺折,組織塊本身不要太大。脂肪組織和軟骨組織本身容易脫片;
(6)如果掉片很多的話,可以考慮ihc過程中的每一步水洗時(shí)間盡量縮短(在不影響結(jié)果的情況下)。
保存條件存儲(chǔ):在- 20°C為一年。避免重復(fù)凍融循環(huán)。凍干抗體穩(wěn)定在至少一個(gè)月室溫超過一年保持在20°當(dāng)用無菌PBS pH 7.4緩沖或稀釋的抗體抗體穩(wěn)定至少兩周在2-4°C.本公司產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品名稱 |
磷酸化組蛋白H3抗體說明書 |
英文名稱 |
Anti-Phospho-Histone H3 |
規(guī)格 |
100ul |
貨號(hào) |
K215348 |
【相關(guān)標(biāo)記有】:
Alexa Fluor 350 標(biāo)記、Alexa Fluor 488 標(biāo)記、Alexa Fluor 555 標(biāo)記、Alexa Fluor 647 標(biāo)記、AP標(biāo)記、APC標(biāo)記、Biotin標(biāo)記、Cy3標(biāo)記、Cy5標(biāo)記、Cy5.5標(biāo)記、Cy7標(biāo)記、FITC標(biāo)記、Gold標(biāo)記、HRP標(biāo)記、PE標(biāo)記、PE-Cy3標(biāo)記、PE-CY5標(biāo)記、PE-CY5.5標(biāo)記、PE-CY7標(biāo)記、RBITC標(biāo)記.
抗體溶解方法:
方法一:我們的抗體(凍干粉)已經(jīng)包含了0.01M PBS、1% BSA和0.1% 防腐劑(疊氮鈉或慶大霉素),您只需要加入的雙蒸水就行了。抗體溶解后,置于-20℃保存,好分裝后使用,避免反復(fù)凍融,可保證至少1年有效;
方法二:也可以只加入一半體積的雙蒸水,再用一半體積的甘油補(bǔ)足,置于-20℃保存,這樣抗體不會(huì)凍,有利于抗體的穩(wěn)定。
后續(xù)試驗(yàn)時(shí),再使用對(duì)應(yīng)的緩沖液稀釋成工作液,即用即配。
我們的抗體(凍干粉),在常溫放置下,至少一個(gè)月有效;若在-20℃下保存(推薦),至少三年有效。
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