細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細(xì)胞計數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	769-P人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞	英文名稱	769-P:769P
產(chǎn)品貨號	A01X634	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%
生長特性	貼壁細(xì)胞	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	器官：腎；：腎透明細(xì)胞腺癌	用途	僅供科研研究實驗

商品詳情：

生長特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

生長培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

背景描述 769-P細(xì)胞來源于原發(fā)性透明細(xì)胞腺癌；769-P細(xì)胞呈邊界不清楚的球形、高核質(zhì)比、有微絨毛和橋粒；769-P細(xì)胞可以在軟瓊脂中生長。

年齡（性別） 女；63歲

組織來源 器官：腎；：腎透明細(xì)胞腺癌

細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型 腎癌細(xì)胞

生物等級 1

倍增時間 ~35 hours

致瘤性 Yes, forms colonies in soft agar.Yes, forms tumors in immunosuppressed hamsters.Yes, forms tumors in nude mice.

保藏機構(gòu) ATCC; CRL-1933

核仁結(jié)構(gòu)域蛋白NOM1抗體    NOM1

通用轉(zhuǎn)錄因子2H亞基3/TTFIIH p34抗體    GTF2H3

四分子交聯(lián)體14抗體（四旋蛋白）  Anti-TSPAN14    磷酸化血小板源性生長因子受體-B抗體  Anti-Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr771)

磷酸化泌乳素抗體  Anti-phospho-PRL (Ser163)    突觸結(jié)合蛋白12抗體  Anti-Synaptotagmin XII

磷酸化著絲粒蛋白A    Phospho-CENPA (Ser7)

嗅覺受體5AU12抗體   OR5B12

原癌基因WIP1抗體  Anti-WIP1/PPM1D    磷酸化細(xì)胞核分離基因C蛋白抗體  Anti-phospho-NUDC(Ser326)

環(huán)指蛋白123抗體  Anti-RNF123    睪丸凋亡基因抗體  Anti-SRG11/Spata17

大鼠β-防御素(β-Defensins)elisa分析檢測試劑盒    Rat β-Defensins ELISA Kit

人核心結(jié)合因子α1,CBFA1/RUNX2 elisa分析檢測試劑盒    HumanCoreBindingFactoralpha1CBFA1/RUNX2ELISAKit

木質(zhì)素含量測試盒    大鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)elisa分析檢測試劑盒

組織甘油二脂酰激酶（DAG KINASE）酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒    人干擾素活化基因205(Ifi205)elisa分析檢測試劑盒

LCK相互作用膜蛋白抗體    LIME

769-P人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞絨毛膜絨毛體催乳素樣蛋白1抗體    CSHL1

白細(xì)胞介素27β抗體    IL-27beta

果桃α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗體    alpha-L-arabinofuranosidase

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達到90%時，進行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細(xì)胞凍存。