細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	B16-F10小鼠黑色素瘤細(xì)胞	英文名稱	B16-F10:B16F10
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X1032	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%,
生長(zhǎng)特性	貼壁細(xì)胞	細(xì)胞形態(tài)	梭形細(xì)胞樣；上皮樣細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	小鼠	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來(lái)源	器官：皮膚；品系：C57BL/6J；：黑色素瘤	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 梭形細(xì)胞樣；上皮樣細(xì)胞樣

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)方案A（默認(rèn)）

生長(zhǎng)培養(yǎng)基:

RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

培養(yǎng)條件:

氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2-3次/周

注意事項(xiàng) B16系列細(xì)胞，使用DMEM培養(yǎng)時(shí)可能出現(xiàn)黑色素快速積累，細(xì)胞不增殖或死亡的情況，該細(xì)胞正常擴(kuò)增凍存請(qǐng)使用RPMI-1640完培，若您需要進(jìn)行分泌黑色素等后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)，可以在擴(kuò)增凍存細(xì)胞后更換為DMEM培養(yǎng)來(lái)滿足實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

參考資料(來(lái)源文獻(xiàn))

背景描述 B16-F10細(xì)胞是B16-F0細(xì)胞的亞系。

年齡（性別） 不詳

組織來(lái)源 器官：皮膚；品系：C57BL/6J；：黑色素瘤

細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型 黑色素瘤細(xì)胞

生物等級(jí) BSL-1

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-6475

磷酸化Ephrin B2抗體    phospho-Ephrin B2 (Tyr311/316)

熱休克因子蛋白5抗體    HSF5

血小板反應(yīng)蛋白抗體  Anti-TSP-1/THBS1/Thrombospondin 1    G蛋白偶聯(lián)嘌呤受體p2y12抗體  Anti-P2Y12

蛋白酶調(diào)解因子8抗體  Anti-PSMD8    SMAD家族9抗體  Anti-SMAD9

羅丹明標(biāo)記的兔抗人IgA    Rabbit Anti-Human IgA / RBITC

磷酸化接頭蛋白Gab 2抗體   phospho-GAB2 (Tyr452)

鋅指蛋白474抗體  Anti-ZNF474/ZFP106    神經(jīng)元素2抗體  Anti-Neurogenin 2/NGN2

磷酸化原癌基因c-Met相關(guān)酪氨酸激酶抗體  Anti-phospho-Ron/MST1R(Ser1349)    腫瘤抑制蛋白18抗體  Anti-ST18/Znf387

大鼠17-酮類固醇(17-KS)elisa分析檢測(cè)試劑盒    17-KS ELISA Kit

人復(fù)制蛋白A(RPA-70)elisa分析檢測(cè)試劑盒    HumanRPA-70ELISAKit

人肺炎支原體抗體(MP-Ab)elisa分析檢測(cè)試劑盒    細(xì)胞結(jié)合（酯化）酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒

小鼠腺苷酸環(huán)化酶10(ADCY10)elisa檢測(cè)試劑盒    大鼠抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)

惡性纖維組織細(xì)胞瘤抗體    MFHA1/Malignant fibrous histiocytoma

B16-F10小鼠黑色素瘤細(xì)胞脫氫肽酶1抗體    DPEP1

BCL2樣10促凋亡蛋白抗體 BCL2L10    CD20抗體 CD20

酪氨酸磷酸酶受體相互作用蛋白Liprin α2抗體 Liprin alpha 2    磷酸二酯酶8B抗體 PDE8B

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無(wú)超過(guò)80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過(guò)度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。