細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纖維細(xì)胞	英文名稱	BALB/3T3 clone A31:BALB3T3 clone A31
產(chǎn)品貨號	A01X1035	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%
生長特性	貼壁細(xì)胞	細(xì)胞形態(tài)	成纖維細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	小鼠	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	胚胎；成纖維細(xì)胞	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

生長特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

生長培養(yǎng)基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:2-1:3

推薦換液頻率 2~3次/周

背景描述 BALB/3T3 clone A31細(xì)胞是由S·A·Aaronson和G·T·Todaro于1968年從裂解的14-17天的BALB/c小鼠胚胎中建立的幾株細(xì)胞之一。BALB/3T3 clone A31細(xì)胞對接觸抑制特別敏感，生長需高倍數(shù)稀釋，飽和濃度低。此外，BALB/3T3 clone A31細(xì)胞對癌基因DNA病毒SV40和小鼠肉瘤病毒高度易感。

年齡（性別） 胚胎，懷孕14-17天

組織來源 胚胎；成纖維細(xì)胞

細(xì)胞類型 自發(fā)永生化細(xì)胞

生物等級 1

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CCL-163 ECACC; 86110401

環(huán)一螺旋蛋白1抗體    NHLH1

糖代謝相關(guān)蛋白1抗體    GMRP1

腫瘤易感基因101蛋白抗體  Anti-Tsg101    纖維蛋白溶酶原抗體  Anti-Plasminogen

緊密連接蛋白抗體  Anti-OCLN/Occludin    磷酸化5-脂氧合酶抗體  Anti-Phospho-5-Lipoxygenase(Ser663)

磷酸化核因子NFκB抑制蛋白激酶i抗體    phospho-IKKi (Thr501)

嗅覺受體51V1抗體   OR51V1

信號通路WNT8A抗體  Anti-Wnt8A    腦特異性蛋白BPX抗體  Anti-NAP1L2

受體活性修飾蛋白3抗體  Anti-RAMP3    Tafazzin蛋白抗體  Anti-Tafazzin

大鼠白介素1受體樣1(IL1RL1)elisa分析檢測試劑盒    IL1RL1 ELISA Kit

人肌紅蛋白(MYO/MB)elisa分析檢測試劑盒    HumanMyoglobinELISAKit

小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)elisa分析檢測試劑盒    麥芽汁β-葡聚糖含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒

豬兒茶酚胺(CA)elisa檢測試劑盒    大鼠血管緊張素1-7（ANG 1-7）elisa檢測試劑盒

層粘連蛋白β4抗體    Laminin subunit beta-4/LAMB4

BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纖維細(xì)胞外殼蛋白COPE抗體    COPE

人單純皰疹病毒Ⅰ型神經(jīng)毒性因子ICP34.5抗體    Neurovirulence factor ICP34.5

中心激酶MAP4K2抗體    Germinal Center Kinase

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細(xì)胞凍存。