細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	BT-20人乳腺癌細(xì) 80DE	英文名稱	Detroit562：Detroit 562
產(chǎn)品貨號(hào)	AXB6155	培養(yǎng)條件	EMEM+10% fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2
生長(zhǎng)特性	貼壁生長(zhǎng)	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	90% FBS + 10% DMSO
組織來(lái)源	乳腺	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

種屬來(lái)源: 人

性別年齡： 74 歲，女性

組織來(lái)源: 乳腺

生長(zhǎng)特性： 貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài): 上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞規(guī)格: 1 X 10 6cells/T25 或 1 mL 凍存管

培養(yǎng)條件: EMEM+10% fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2

凍存條件: 90% FBS + 10% DMSO

傳代方法：1:3 傳代, 2-3 天傳 1 代

錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A1抗體       ANKRD20A1

細(xì)胞線粒體復(fù)合物I蛋白表達(dá)熒光定量檢測(cè)試劑盒       犬白介素-6（IL－6）elisa檢測(cè)試劑盒

內(nèi)著絲粒蛋白抗體       INCENP

蛋白酶體PSMβ3抗體       Proteasome 20S beta 3

葡萄膜自身抗原Uaca抗體  Anti-UACA       血小板47蛋白抗體  Anti-Pleckstrin/p47

超微量ATP酶測(cè)試盒Na+K+、Ca2+Mg2+、T－ATP酶 50管/25樣 100管/50樣 比色法       小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)elisa檢測(cè)試劑盒

CD83抗體      CD83

多谷氨酰胺結(jié)合蛋白1抗體  Anti-PQBP1       12脂氧合酶抗體  Anti-ALOX12/12 Lipoxygenase鋅結(jié)合乙醇脫氫酶結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體       ZADH1

19號(hào)染色體開(kāi)放閱&#       C19orf43

PE-CY5標(biāo)記的羊抗人IgM       Goat Anti-Human IgM / PE-Cy5

犬C反應(yīng)蛋白(CRP)elisa分析檢測(cè)試劑盒       CRP ELISA Kit

小鼠核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)elisa分析檢測(cè)試劑盒       Nrf2ELISAKit

猴催乳素(PRL/LTH)elisa分析檢測(cè)試劑盒       PRL/LTH ELISA Kit

BT-20人乳腺癌細(xì) 80DE人二氫嘧啶酶樣2(DPYSL2)elisa分析檢測(cè)試劑盒       DPYSL2ELISAKit

甲基CpG結(jié)合域蛋白3樣2抗體       MBD3L2

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無(wú)超過(guò)80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過(guò)度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。