細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	Capan-2人胰腺癌細(xì)胞	英文名稱	Capan-2:Capan2
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X681	培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；
生長(zhǎng)特性	貼壁生長(zhǎng)	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
組織來源	胰腺	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

細(xì)胞別稱：Capan-2；人胰腺癌細(xì)胞

種屬來源：人

年齡性別：40歲，男

組織來源：胰腺

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

背景簡(jiǎn)介：Capan-2是一種多角形細(xì)胞系，1975年從一名56歲白人男性胰腺癌患者的胰腺中分離出來。該細(xì)胞比較難消化，且消化后貼壁時(shí)間較長(zhǎng)，因此傳代處理后48h內(nèi)盡量不要移動(dòng)，防止影響貼壁，該細(xì)胞易聚團(tuán)成斑塊狀生長(zhǎng)，生長(zhǎng)非常緩慢，偶爾有少量細(xì)胞飄著是屬正?，F(xiàn)象，保持營(yíng)養(yǎng)充足即可。

生物等級(jí)：1

細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測(cè)：無

基因表達(dá)情況：Blood Type B; Rh+; high levels of MUC-1 mucin mRNA; low levels of MUC-2 mRNA; MUC-3 gene not expressed

保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; HTB-80BCRJ; 0060CLS; 300144/p660_Capan-2DSMZ; ACC-245IZSLER; BS TCL 10KCLB; 30080

培養(yǎng)基：McCoy's 5A＋10% FBS＋1% P/S

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

倍增時(shí)間：96 hours (PubMed=3019537); 45-60 hours (CLS); ~50-70 hours (DSMZ).

STR鑒定位點(diǎn)Amelogenin：X；CSF1PO：11,12；D2S1338：19,25；D3S1358：17,18；D5S818：11,12；D7S820：9,11；D8S1179：12,13；D13S317：11,12；D16S539：9,13；D18S51：13；D19S433：13,15；D21S11：31；FGA：21,24；PentaD：13,15；PentaE：11；TH01：9.3；TPOX：8；vWA：17；D6S1043：11；D12S391：20,23；D2S441：8,10；

人登革熱(DF)抗體(IgG)elisa分析檢測(cè)試劑盒       HumanDFIgGELISAkit

體外非細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞色素P450亞酶2A6（COUMARIN）活性       四、細(xì)胞凋亡整體解決方案——Apoptosis

驢黃體**素(LH)elisa分析檢測(cè)試劑盒       LH ELISA Kit

粘蛋白-1抗體       MUC1

色氨酸相關(guān)蛋白3抗體  Anti-TRPC3       中間絲相關(guān)蛋白抗體  Anti-Repetin

大鼠磷酸化糖原合成酶激酶3(pGSK-3)elisa檢測(cè)試劑盒       純化線粒體蛋白質(zhì)濃度定量測(cè)定試劑盒

22號(hào)染色體開放閱讀框45抗體      C22orf45

腦紅蛋白/神經(jīng)血紅蛋白/神經(jīng)球蛋白抗體  Anti-NGB/neuroglobin       磷酸化Smad2抗體  Anti-phospho-Smad2 (Ser465)胎盤蛋白6抗體       PL6

人多巴胺(DA)elisa分析檢測(cè)試劑盒       DAELISAKIT

PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗大鼠IgM       Rabbit Anti-Rat IgM / PE-Cy5.5

人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)elisa分析檢測(cè)試劑盒       αNAGELISAKit

豬D-乳酸脫氫酶(D-LDH)elisa分析檢測(cè)試劑盒       D-LDHELISAKit

大鼠泛素激活酶(E1/UBAE)elisa分析檢測(cè)試劑盒       E1/UBAE ELISA Kit

Capan-2人胰腺癌細(xì)胞山羊骨保護(hù)素(OPG)elisa分析檢測(cè)試劑盒       OPGELISAKIT

倉鼠組織蛋白酶K(cath-K)elisa分析檢測(cè)試劑盒       cath-K ELISA Kit

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。