細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	DMS 53人肺癌細(xì)胞	英文名稱	DMS 53:DMS 53
產(chǎn)品貨號	A01X704	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%,
生長特性	貼壁細(xì)胞	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	肺	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

生長特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)方案A（默認(rèn)）

生長培養(yǎng)基:

Waymouth's MB 752/1+10%FBS＋1%P/S

培養(yǎng)條件:

氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃

推薦傳代比例 1:2-1:3

推薦換液頻率 2-3次/周

參考資料(來源文獻(xiàn))

背景描述 DMS 53 is a cell line exhibiting epithelial morphology that was isolated in 1974 from the lung of a 54-year-old, White male patient with carcinoma.

年齡（性別） 男性；54歲

組織來源 肺

細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型 肺癌細(xì)胞

生物等級 BSL-1

倍增時間 5.7 days (PubMed=6266631); 4.9 days (PubMed=2986244)

致瘤性 Yes; Yes, tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 10^7 cells.

受體表達(dá)情況 Bombesin, expressed; epidermal growth factor (EGF), expressed; transforming growth factor beta (TGF beta), expressed; acetylcholine, expressed

抗原表達(dá)情況 Leu 7; My23

基因表達(dá)情況 adrenocorticotropin (adrenocorticotropic hormone, ACTH); bombesin; calcitonin; human chorionic gonadotropin (hCG); glucagon; growth hormone; 17 beta estradiol; thyroid releasing hormone; oxytocin - neurophysin (OT-NP); parathormone; somatostatin-like immunoreactivity (SRIF)

保藏機(jī)構(gòu) AddexBio; C0016027/4988 ATCC; CRL-2062 ECACC; 95062823

生長停滯特異性蛋白8抗體       GAS8

血小板生成素受體抗體  Anti-TPOR/CD110/C-MPL       磷酸化p21激活激酶1/2/3抗體  Anti-phospho-PAK1/2/3(Thr423)

NDUFS5蛋白抗體       NDUFS5

上皮細(xì)胞有絲分裂蛋白抗體       Epi

T細(xì)胞負(fù)調(diào)節(jié)蛋白抗體  Anti-VSIG4       類固醇受體激活蛋白2抗體  Anti-NCOA2/KAT13C/GRIP1

跨膜蛋白Orai2抗體  Anti-Orai2       肌動蛋白依賴染色質(zhì)調(diào)控因子SMARCD3蛋白抗體  Anti-SMARCD3

親核素β1抗體      NTF97

神經(jīng)元突觸膜胞外分泌調(diào)節(jié)蛋白4抗體  Anti-RIMS4       T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子TFEB抗體  Anti-TFEB人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)elisa分析檢測試劑盒       HumanTIMP-4ELISAKit

腦型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 FABP7       尿素轉(zhuǎn)運(yùn)型糖蛋白抗體 SLC14A1

大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)elisa分析檢測試劑盒       Cys-C ELISA Kit

人A組鏈球菌菌壁多糖抗體(ASP)elisa檢測試劑盒       C. guilliermondii RFLP基因分析試劑盒

小鼠成纖維細(xì)胞生長因子18(FGF18)elisa檢測試劑盒       大鼠CDCP1 elisa分析檢測試劑盒

賴氨酸N甲基轉(zhuǎn)移酶1B抗體       KMT1B

DMS 53人肺癌細(xì)胞細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白2/腫瘤和微管相關(guān)蛋白抗體       CKAP2

G蛋白γ 1/Gγ 1 抗體 GNGT1       G蛋白偶聯(lián)受體GPR85蛋白抗體 GPR85

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細(xì)胞凍存。