細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	GBC-SD 人膽囊癌細(xì)胞	英文名稱	GBC-SD:GBCSD
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X715	培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；
生長(zhǎng)特性	貼壁生長(zhǎng)	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
組織來(lái)源	膽囊癌	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

細(xì)胞別稱：GBC-SD；人膽囊癌細(xì)胞

種屬來(lái)源：人

年齡性別：男，61歲

組織來(lái)源：膽囊癌

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

背景簡(jiǎn)介：GBC-SD細(xì)胞株是劉博、王占民等2000年從一位61歲的男性低分化膽囊癌患者中建立的；GBC-SD細(xì)胞的形狀有多邊形、紡錘形和正方形；GBC-SD細(xì)胞能分泌CEA和CA19-9。GBC-SD細(xì)胞倍增時(shí)間：大約為21.4小時(shí)，可移植到裸鼠，**的腫瘤與原發(fā)腫瘤相似。

生物等級(jí)：

細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測(cè)：無(wú)

基因表達(dá)情況：

保藏機(jī)構(gòu)：KCB; KCB 201187YJ

培養(yǎng)基：1640+10% FBS+PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

倍增時(shí)間：1640+10% FBS+PS

STR鑒定位點(diǎn)Amelogenin：X,Y；CSF1PO：11,11；D12S391：19,20；D13S317：8,12；D16S539：11,13；D18S51：14,21；D19S433：14,15.2；D21S11：30,31；D2S1338：17,24；D3S1358：17,17；D5S818：11,11；D6S1043：20,20；D7S820：11,12；D8S1179：10,12；FGA：23,23；Penta E：12,12；TH01：7,10；TPOX：11,11；vWA：16,17；

FOXJ2蛋白抗體 FOXJ2       GTP結(jié)合蛋白SAR1B抗體 SAR1B

胰島素促進(jìn)因子重組兔單克隆抗體 PDX1       乙?；M蛋白H3抗體 Histone H3 (acetyl K9)

腺衍生血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抗體 Prokineticin 1       凝溶膠蛋白抗體 Gelsolin

突觸核膜蛋白2抗體 Nesprin 2       微管蛋白β輔助因子D抗體 Beta tubulin cofactor D

8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框74抗體 C8orf74       AF594標(biāo)記的單體櫻桃紅熒光蛋白標(biāo)簽抗體 mCherry, Alexa Fluor 594 conjugated

多巴胺受體D1重組兔單克隆抗體 DRD1       法尼基轉(zhuǎn)移酶β-亞單位抗體 FNTB

RSPH3蛋白抗體 RSPH3      SH3BGRL2蛋白抗體 SH3BGRL2

鉀離子通道蛋白家族KCNQ1抗體 KCNQ1       卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白114抗體 CCDC114通用型副傷A（Salmonella Paratyphi A）定性基因檢測(cè)試劑盒       小鼠β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)elisa檢測(cè)試劑盒

人丙二醛(MDA)elisa分析檢測(cè)試劑盒       MDAELISAKit

冰凍切片組織P35蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒       大鼠整合素α2(ITGA2)elisa檢測(cè)試劑盒

人EB病毒核抗原1(EBNA1)抗體(IgG)elisa分析檢測(cè)試劑盒       組織CaM KII激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）

小鼠趨化因子(fractalkine/CX3CL1)elisa檢測(cè)試劑盒       大鼠核受體亞家族1D組成員2(NR1D2)elisa檢測(cè)試劑盒

MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒 500T       小鼠過(guò)敏/補(bǔ)體片斷4a(C4a)elisa檢測(cè)試劑盒

GBC-SD 人膽囊癌細(xì)胞微量瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒 50次       石蠟切片結(jié)締組織（CONNECTIVE TISSUE）摩羅利 （mallory）染色試劑盒

魚(yú)白介素8(IL-8/CXCL8)elisa分析檢測(cè)試劑盒       IL-8 ELISA Kit

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無(wú)超過(guò)80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過(guò)度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。