細胞培養(yǎng)操作：

1) 復蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	HBE135-E6E7人支氣管上皮細胞	英文名稱	HBE135-E6E7:HBE135E6E7
產(chǎn)品貨號	A01X725	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%,
生長特性	貼壁細胞	細胞形態(tài)	上皮細胞樣；卵圓形
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	凍存液：55%DM/F12+40%FBS+5%DMSO
組織來源	肺；支氣管	用途	僅供科研研究實驗

商品詳情：

生長特性 貼壁細胞

細胞形態(tài) 上皮細胞樣；卵圓形

凍存條件

凍存液：55%DM/F12+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)方案A（默認）

生長培養(yǎng)基:

HBE135-E6E7 細胞培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件:

氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:4

推薦換液頻率 2-3次/周

參考資料(來源文獻)

背景描述 The HBE135-E6E7 cell line was derived from normal bronchial epithelium taken from a man undergoing lobectomy for squamous cell carcinoma. Cells from the primary explant in their first passage were infected with the recombinant retrovirus LXSN16E6E7 containing the human papilloma virus (HPV) E6E7 gene. Cells were selected in the presence of 0.4 mg/mL G418

年齡（性別） 男性,；54歲

組織來源 肺；支氣管

細胞類型 轉(zhuǎn)化細胞系

生物等級 BSL-2

倍增時間 24-30 hours

保藏機構(gòu) ATCC; CRL-2741

6號染色體開放閱讀框57抗體 C6orf57       ABH5蛋白抗體 ALKBH5

源盒基因HOXA6蛋白抗體 HOXA6       脫支酶源蛋白DBR1抗體 DBR1

角蛋白相關(guān)蛋白15.1抗體 KAP15.1       精子頂體膜相關(guān)蛋白3抗體 SPACA3

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白RER1抗體 RER1       胚胎外精子源蛋白1抗體 ESX1

胰高血糖素抗體 Glucagon       異質(zhì)核糖核蛋白M3-M4抗體 hnRNP M3-M4

RNA結(jié)合蛋白23抗體 RBM23       SC35蛋白抗體 SC35

GalNAc-T4 抗體 GALNT4      G蛋白結(jié)合蛋白2抗體 GBP2

多腺苷二磷酸多聚酶/多聚ADP-核糖聚合酶1單克隆抗體 PARP1       芳香乙酰胺脫乙?；缚贵w AADAC細胞色素P450亞酶CYP3A1（BROD）活性熒光定量檢測試劑盒       小鼠90kDa熱休克蛋白αA1(HSP90αA1)elisa檢測試劑盒

共濟失調(diào)性眼球運動功能喪失相關(guān)蛋白AOA1抗體       Aprataxin

DNA吖啶橙（acridine orange）熒光檢測試劑盒       大鼠戊糖素(Pentosidine)elisa檢測試劑盒

牛羧化不全骨鈣素(ucOC)elisa分析檢測試劑盒       血液二胺氧化酶（DAO）活性比色法定量檢測試劑盒

小鼠抗IgE受體抗體elisa分析檢測試劑盒       大鼠彈性蛋白酶3B(ELA3B)elisa檢測試劑盒

組蛋白H3-K56（mono/di）甲基化檢測試劑盒       小鼠叉頭框蛋白P3(FOXP3)elisa檢測試劑盒

HBE135-E6E7人支氣管上皮細胞革蘭氏陰性菌蛋白提取試劑盒100T       冰凍切片組蛋白H3-K9甲基化組化檢測試劑盒

連接蛋白JPH3抗體       Junctophilin 3

細胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當顯微鏡下細胞形態(tài)和生長密度達到90%時，進行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細胞，吹打細胞使其均勻分散。
（7）吸棄細胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細胞凍存。