細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	HCT-15/Taxol人結(jié)直腸癌紫杉醇耐藥株	英文名稱	HCT-15/Taxol:HCT15Taxol
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X739	培養(yǎng)條件
生長(zhǎng)特性	貼壁生長(zhǎng)	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	詳見說明
組織來(lái)源	人結(jié)腸癌	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

x細(xì)胞介紹

注：本培養(yǎng)基是不直接添加紫杉醇的。如果客戶需要直接添加的我們可以按照客戶的意愿添加紫杉醇。

細(xì)胞特性

1）來(lái)源：人結(jié)腸癌

2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

3）含量：>1x106細(xì)胞數(shù)

4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

補(bǔ)體C1qγ鏈多肽抗體 C1QC       成纖維細(xì)胞核受體Nr5a2抗體 NR5A2

DNA聚合酶δ 抗體 DNA polymerase delta       EDC3蛋白抗體 EDC3

鋅指蛋白347抗體 ZNF347       鋅指蛋白735抗體 ZNF735

自噬相關(guān)蛋白4A抗體 ATG4A       組織蛋白酶H抗體 Cathepsin H

P53誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡抑制蛋白抗體 NME5       PE-Cy7標(biāo)記人CD279 (PD-1)單克隆抗體 human CD279 (PD-1)/PE-Cy7

磷酸化紅細(xì)胞**素受體抗體 phospho-EPO Receptor (Tyr485)       磷酸化上皮鈣粘附分子抗體 Phospho-E Cadherin (Ser838 + Ser840)

核纖層蛋白B抗體(細(xì)胞核膜標(biāo)志物) [KO驗(yàn)證抗體] Lamin B1      互養(yǎng)蛋白1,2,3抗體 Syntrophin-1+2+3

神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1β2抗體 HRG1       水通道蛋白4單克隆抗體 Aquaporin 4膽紅素氧化酶 EC1.3.3.5 1KU/瓶       載玻片細(xì)胞βAMYLOID蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒

比伐盧定（水蛭素類似物）抗體       Bivalirudin

Caspase 9抑制劑1400ul       小鼠白介素-5(IL-5)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠水通道蛋白2(AQP-2)elisa檢測(cè)試劑盒       大鼠激肽釋放酶4(KLK4)elisa檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞RCT激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C）       人精氨酸酶（Arg）elisa檢測(cè)試劑盒

牛生長(zhǎng)抑素(SS)elisa分析檢測(cè)試劑盒       電鏡組織基吡啶固著液（2,4,6-Trimethylpyridine puriss）

HCT-15/Taxol人結(jié)直腸癌紫杉醇耐藥株小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α（MIP1α）elisa檢測(cè)試劑盒       大鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)elisa檢測(cè)試劑盒

ILK結(jié)合蛋白LIMS2抗體       LIMS2

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無(wú)超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。