細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	HOS人骨肉瘤細(xì)胞	英文名稱	HOS:HOS
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X767	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%
生長(zhǎng)特性	貼壁細(xì)胞	細(xì)胞形態(tài)	成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	骨；骨肉瘤	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

商品詳情：

生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)培養(yǎng)基 MEM（含NEAA）＋10% FBS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:2-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

背景描述 HOS細(xì)胞是從一名13歲的白人女性的骨肉瘤組織中分離建立的；HOS細(xì)胞表現(xiàn)為扁平形態(tài)、低飽和密度、軟瓊脂中的低克隆形成率和對(duì)化合物及病毒感染的敏感性。

年齡（性別） 女；13歲

組織來源 骨；骨肉瘤

細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型 肉瘤細(xì)胞

生物等級(jí) 1

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-1543 ECACC; 87070202

MOGAT2蛋白抗體 MOGAT2       NDUFC2蛋白抗體 NDUFC2

周期素依賴性激酶4抗體 CDK4       轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子RFX4抗體 RFX4

色素上皮源性因子抗體 PEDF       神經(jīng)特異性轉(zhuǎn)錄因子DPF1抗體 Neuro D

腺嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶抗體 APRT       鋅指蛋白180抗體 ZNF180

Cezanne蛋白抗體 Cezanne       DHX34蛋白抗體 DHX34

谷氧還蛋白3抗體 GLRX3/TXNL2       含patatin樣磷脂酶1抗體 PNPLA1

白細(xì)胞介素29抗體 IL29      苯二氮卓單小鼠單抗 BZO

磷酸化p21激活激酶3抗體 phospho-PAK3 (Ser154)       磷酸化孤兒核受體蛋白Nur77抗體 Phospho-Nur77 (Ser351)大鼠生長(zhǎng)分化因子15(GDF15)elisa檢測(cè)試劑盒       植物蛋白氧化（羰基化；carbonyl）熒光檢測(cè)試劑盒

Acinus抗體       Acinus

RNA探針位素（[α32P]CTP）聚合酶標(biāo)記試劑盒       維生素B1測(cè)試盒

小鼠肌侵蛋白(MTPN)elisa檢測(cè)試劑盒       大鼠丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)elisa檢測(cè)試劑盒

冰凍切片a-染色試劑盒       人白介素1β前體(pro-IL1B)elisa分析檢測(cè)試劑盒

雞CD3分子(CD3)elisa分析檢測(cè)試劑盒       冰凍切片組織鈣ATP酶SERCA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒

HOS人骨肉瘤細(xì)胞小鼠白介素22(IL22)elisa檢測(cè)試劑盒       大鼠 睪酮 Testoterone elisa檢測(cè)試劑盒

異質(zhì)核核糖核蛋白L樣蛋白抗體       hnRNPLL

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。