細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	KB人口腔表皮癌細(xì)胞	英文名稱	KB:KB
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X808	培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；
生長(zhǎng)特性	貼壁生長(zhǎng)	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
組織來源	口腔	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞別稱：KB；人口腔表皮樣癌細(xì)胞

種屬來源：人

年齡性別：30歲

組織來源：口腔

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

背景簡(jiǎn)介：初認(rèn)為這個(gè)細(xì)胞源自口腔表皮癌，但隨后通過同工酶分析、HeLa標(biāo)記染色體和DNA指紋分析發(fā)現(xiàn)，起源細(xì)胞已被HeLa污染。角蛋白陽(yáng)性。有報(bào)告稱，KB細(xì)胞含有人狀瘤病毒18(HPV-18)序列。

生物等級(jí)：2

細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測(cè)：無(wú)

基因表達(dá)情況：keratin

保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; CCL-17 BCRJ; 0128 DSMZ; ACC-136 ECACC; 86103004 ECACC; 94050408

培養(yǎng)基：90%MEM+10% FBS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

倍增時(shí)間：~30 hours

STR鑒定位點(diǎn)Amelogenin：X；CSF1PO：9，10；D13S317：12，14；D16S539：9，10；D18S51：16；D19S433：13，14；D21S11：27，28；D2S1338：17；D3S1358：15，18；D5S818：11，12；D7S820：8，12；D8S1179：12，13；FGA：21；TH01：7；TPOX：8，12；vWA：16，18;

1號(hào)染色體開放閱讀框222抗體       C1orf222

肝素（heperin）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒       核黃素轉(zhuǎn)運(yùn)因子1(RFT1)elisa檢測(cè)試劑盒

白細(xì)胞介素37抗體       IL-37

棕櫚酰蛋白水解酶2抗體       PPT2

尿卟啉原脫羧酶抗體  Anti-UROD       豬繁殖與呼吸綜合征/豬藍(lán)耳病抗體  Anti-PRRSV

磷酸二酯酶7B（Phosphodiesterase 7B）       小鼠彈性蛋白(ELN)elisa檢測(cè)試劑盒

真核翻譯起始因子3亞基L/eIF3e蛋白抗體      IF3EI

細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶5激活因子1抗體  Anti-p35/CDK5P1       絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶2抗體  Anti-SPTLC2FOXN4蛋白抗體       FOXN4

Gm13152蛋白抗體       Gm13152

APC標(biāo)記的羊抗人IgM       Goat Anti-Human IgM / APC

犬P選擇素(SELP)elisa分析檢測(cè)試劑盒       SELP ELISA kit

小鼠花生四烯酸(AA)elisa分析檢測(cè)試劑盒       AAELISAKit

猴抗肝細(xì)胞膜抗體(LMA)elisa分析檢測(cè)試劑盒       LMA ELISA Kit

KB人口腔表皮癌細(xì)胞人泛素激活酶(E1/UBAE)elisa分析檢測(cè)試劑盒       E1/UBAEELISAKit

核轉(zhuǎn)錄因子YC抗體       NFYC

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無(wú)超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。