細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	KYSE-410人食管鱗癌細(xì)胞	英文名稱	KYSE-410
產(chǎn)品貨號	AXB9843	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%
生長特性	貼壁細(xì)胞	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來源	食管鱗癌	用途	僅供科研研究實驗

生長特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

生長培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:4-1:6

推薦換液頻率 2~3次/周

背景描述 Established from the poorly differentiated invasive esophageal squamous cell carcinoma resected from the cervical esophagus of a 51-year-old Japanese man prior to treatment (tumor invasion into the adventitia was obvious); described in the literature to overexpress hst-1 (= heparin-binding growth factor) and cyclin D1

年齡（性別） 女；51歲

組織來源 食管鱗癌

細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型 食管癌細(xì)胞

生物等級 1

倍增時間 ~32-45 hours

保藏機構(gòu) DSMZ; ACC-381 ECACC; 94072023 JCRB; JCRB1419

生長因子受體結(jié)合適應(yīng)蛋白抗體       GAPT

跨膜轉(zhuǎn)運蛋白21抗體  Anti-TMP21       鋅指蛋白RIZ1抗體  Anti-PRDM2

NDUFB6蛋白抗體       NDUFB6

磷酸化細(xì)胞周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體       phospho-RAD9 (Ser272)

波形蛋白抗體  Anti-Vimentin       神經(jīng)束蛋白186抗體  Anti-Nfasc186

骨誘導(dǎo)因子抗體  Anti-OIF       14-3-3蛋白/14-3-3 α/β/γ/δ/ε亞型抗體  Anti-14-3-3 (Alpha, Beta, Gamma, Delta, Epsilon)

NSUN4蛋白抗體      NSUN4

環(huán)指蛋白157抗體  Anti-RNF157       兔抗甲狀腺球蛋白  Anti-TG人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1β(SDF-1β/SDF1B)elisa分析檢測試劑盒       SDF-1β/SDF1BELISAkit

ACN9蛋白抗體       ACN9

大鼠表皮生長因子(EGF)elisa分析檢測試劑盒       EGF ELISA Kit

牛纖維蛋白原(Fb)elisa分析檢測試劑盒       TUBULIN蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒

小鼠白介素10(IL-10)elisa檢測試劑盒       倉鼠極低密度脂蛋白(VLDL)elisa分析檢測試劑盒

Kelch樣蛋白26抗體       KLHL26

KYSE-410人食管鱗癌細(xì)胞細(xì)胞因子誘導(dǎo)蛋白29kDa抗體       CIP29

HORMAD1蛋白抗體       HORMAD1

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細(xì)胞凍存。