細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	MDA-MB-231+LUC人乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記	英文名稱	MDA-MB-231+LUC:MDAMB231LUC
產(chǎn)品貨號	A01X841	培養(yǎng)條件	氣相：95%空氣+5%二氧化碳；
生長特性	貼壁生長	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	無血清凍存液，液氮儲存
組織來源		用途	僅供科研研究實驗

細(xì)胞別稱：MDA-MB-231-LUC-PURO；人三陰性乳腺癌細(xì)胞-LUC-PURO；人三陰性乳腺癌細(xì)胞株-熒光素酶標(biāo)記

種屬來源：人

年齡性別：女

組織來源：

生長特性：貼壁生長

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

背景簡介：MDA-MB-231是從一名51歲的白人女性乳腺癌患者的胸水中分離建立的，能穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲熒光素酶。此細(xì)胞株性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)時不需要添加維持?？捎米魑灮鹣x熒光素酶活性檢測中的陽性對照，也可用于活體動物成像實驗。該細(xì)胞表達(dá)EGF受體、TGF-&alpha受體和WNT7B癌基因，通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。在裸鼠和ALS處理的BALB/c小鼠中，能形成低分化腺癌(Ⅲ級)。

生物等級：1

細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測：無

puro藥篩濃度MDA-MB-231-LUC細(xì)胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml，培養(yǎng)過程中可不用再添加puro，如若擔(dān)心抗性隨著傳代時間降低，可定期用0.5ug/ml濃度puro維持。加藥需在細(xì)胞狀態(tài)良好情況下。

保藏機構(gòu)：ATCC; CRL-12532 ATCC; HTB-26 ATCC; CRM-HTB-26 BCRC; 60425 BCRJ; 0164 DSMZ; ACC-732 ECACC; 92020424

培養(yǎng)基：89% DMEM +10% FBS+1%PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

血紅蛋白ζ鏈/Hemoglobin ζ 抗體       HBZ

端粒結(jié)合蛋白2抗體  Anti-TRF2       蛋白激酶C beta 1/2抗體  Anti-PKC beta 1/2

核孔蛋白樣蛋白2抗體       NUPL2

磷酸化活化復(fù)制因子2抗體       phospho-ATF2 (Ser480)

鋅指蛋白BED5抗體  Anti-ZBED5       神經(jīng)毒性因子ICP34.5（人單純皰疹Ⅰ型）抗體  Anti-HSV 1

磷酸化酶激酶γ2  Anti-PHKG2       信號誘導(dǎo)增殖相關(guān)蛋白1樣蛋白2抗體  Anti-SIPA1L2

嗅覺受體5M11抗體      OR5M11

鋅指蛋白754抗體  Anti-Rex1/Zinc finger protein 754       神經(jīng)突觸相關(guān)蛋白SLITRK6抗體  Anti-SLITRK6人胱天蛋白酶3(Casp-3)elisa分析檢測試劑盒       Casp-3ELISAKit

人多巴胺-β羥化酶(DBH)elisa分析檢測試劑盒       DBHELISAKit

大鼠Smad1 elisa分析檢測試劑盒       Rat Mothers against decapentaplegic homolog 1 ELISA Kit

細(xì)胞DHPR受體蛋白表達(dá)熒光定量檢測試劑盒       堿性磷酸酶染液偶氮偶聯(lián)法，適用于細(xì)胞樣本 可染20～30張片

EB病毒DNA純化試劑盒       小鼠谷光甘肽合成酶(GSS)elisa檢測試劑盒

蛛受體3抗體       LPHN3

MDA-MB-231+LUC人乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記細(xì)胞質(zhì)FMR1相關(guān)蛋白抗體       CYFIP1

猴B病毒(BV)elisa分析檢測試劑盒       Monkey B virus Infections ELISA Kit

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。
（9）細(xì)胞凍存。