細(xì)胞培養(yǎng)操作：

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書為主。
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至6ml。24-48h后換液。 
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1ml消化液（0.25%Trypsin）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加1ml0.1%大豆胰蛋白酶抑制劑終止消化。
c、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1：3到1:4比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	MDA-MB-453人乳腺癌細(xì)胞	英文名稱	MDA-MB-453:MDAMB453
產(chǎn)品貨號(hào)	A01X846	培養(yǎng)條件	氣相：空氣，100%
生長(zhǎng)特性	半貼半懸	細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
產(chǎn)品種屬	人	凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
組織來(lái)源	乳腺；源自轉(zhuǎn)移部位：胸腔積液	用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

生長(zhǎng)特性 半貼半懸

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)培養(yǎng)基 Leibovitz's L-15＋10% FBS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，100%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:2-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

注意事項(xiàng) 1、該細(xì)胞推薦使用Leibovitz's L-15培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，Leibovitz's L-15不可以通入二氧化碳，會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性； 2、如您沒(méi)有無(wú)二氧化碳的培養(yǎng)箱，可使用DMEM替代Leibovitz's L-15，使用DMEM培養(yǎng)基時(shí)即可正常通入5%二氧化碳； 3、配套培養(yǎng)基默認(rèn)Leibovitz's L-15配置，如需DMEM配方，請(qǐng)聯(lián)系銷售下單備注更改。

背景描述 MDA-MB-453細(xì)胞是由R·Cailleau等在1976年從一位48歲女性腫瘤轉(zhuǎn)移患者胸水中建立的細(xì)胞株，其它轉(zhuǎn)移灶包括結(jié)、腦和胸水及心包腔積水；MDA-MB-453細(xì)胞過(guò)表達(dá)FGF受體。

年齡（性別） 女性，48歲

組織來(lái)源 乳腺；源自轉(zhuǎn)移部位：胸腔積液

細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型 乳腺癌細(xì)胞

生物等級(jí) 1

倍增時(shí)間 ~26-38小時(shí)

致瘤性 No, in immunosuppressed mice.Yes, in semisolid medium.

受體表達(dá)情況 fibroblast growth factor (FGF), expressed

保藏機(jī)構(gòu) ATCC; HTB-131

PHGDH       卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白28B抗體

ICEBERG蛋白抗體       ICEBERG

馬白介素6(IL-6)elisa生化檢測(cè)試劑盒       磷酸甘油酸脫氫酶抗體

小鼠P物質(zhì)受體(SP-R)elisa檢測(cè)試劑盒       防脫載玻片經(jīng)APES處理 50片

腫瘤/睪丸抗原20抗體  Anti-TSP50       三磷酸腺苷受體P2X5抗體  Anti-P2RX5

褐黑素相關(guān)蛋白ART抗體       AGRP

細(xì)胞NF KAPPA B P65蛋白表達(dá)比色法定量檢測(cè)試劑盒      CCDC28B

原鈣粘蛋白1抗體  Anti-PCDHAC1       SET易位蛋白/髓系白血病相關(guān)蛋白抗體  Anti-SET腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子3相互作用蛋白1抗體       TRAF3IP1

小鼠粒細(xì)胞趨化蛋白2(GCP2)elisa檢測(cè)試劑盒       大鼠肥胖抑制素elisa生化檢測(cè)試劑盒

PE-Cy5.5標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG H&L       Donkey Anti-Guinea Pig IgG H&L / PE-Cy5.5

人11β羥類固醇脫氫酶1型(11β-HSD1)elisa生化檢測(cè)試劑盒       Human11β-HSD1ELISAkit

小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)elisa生化檢測(cè)試劑盒       bFGFELISAKit

大鼠20S蛋白酶體(20SP)elisa生化檢測(cè)試劑盒       20SP ELISA kit

MDA-MB-453人乳腺癌細(xì)胞人鈣蛋白酶抑制蛋白(CAST)elisa生化檢測(cè)試劑盒       HumanCASTELISAkit

人α1防御素(DEFA1)elisa生化檢測(cè)試劑盒       通用型蘋果酸脫氫酶（MDH）活性比色法定量檢測(cè)試劑

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：
（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度達(dá)到90%時(shí)，進(jìn)行傳代。
（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。
（3）加入覆蓋瓶底量的胰蛋白酶且含有EDTA。
（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無(wú)超過(guò)80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞 脫落，加入2倍量的胰蛋白酶中止消化，并吹打均勻，避免消化過(guò)度。
（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。
（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。
（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間。
（9）細(xì)胞凍存。